蒲葵子抗癌有效部位的毒理学实验研究

• 作 者: 罗沛
• 机 构: 广西中医药大学
• 出 处: 广西中医药大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 蒲葵 抗癌效果 毒理学 Ames波动试验 微核试验

目的：从蒲葵子的95％乙醇提取液的乙酸乙酯部位纯化出抗癌有效部位，对其进行毒理学研究，确定毒性范围与毒副作用，为进一步临床应用提供实验依据。　　方法：1.将蒲葵子用95%乙醇进行回流提取后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行部位分离。2.分离后几大部位提取物采用MTT法进行初步抗癌有效部位体外细胞药效筛选，并确定有效部位，以进行进一步纯化。3.对确定的有效部位乙酸乙酯部位，利用聚酰胺柱层析法对其进行纯化，得到黄酮类。4.急性毒性实验，选用健康昆明种小鼠20只，雌雄各半，以最大浓度最大给药体积（11g/kg体重）灌胃后，连续观察两周，记录中毒以及死亡情况。5.长期毒性实验，健康SD大鼠120只，按体重随机分为4组（每组30只，雌雄各半），剂量组给药剂量分别为0.325、0.65、1.30g/kg体重，空白组给予纯净水，经口灌胃给药13周，13周后每组均处死2/3大鼠进行血液、生化、病理等指标测定。剩余大鼠于停药4周后处死，方法及观察指标同前。6.遗传毒性试验，包括微量波动试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验。微量波动试验，受试物分别设500，50，5，0.5，0.025μg/ml五个不同浓度，同时设立未处理对照、阴性对照和阳性对照。采用96孔板微量滴定法，在加S9和不加S9条件下进行，经37℃培养5天后观察结果，实验重复两次。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，健康昆明种小鼠60只，随机分为6组（每组10只，雌雄各半），设11、5.5、2.75、1.38 g/kg体重四个剂量组，同时设立阳性对照组（环磷酰胺）和空白对照组(纯净水)，灌胃给药，给药组和空白对照组每天给药一次,连续给药4天，第5天收集骨髓细胞，阳性对照组为腹腔注射环磷酰胺一次，给药后24小时收集骨髓细胞，涂片、染色、观察结果。　　结果：1.本实验用一般中药化学提取方法，对蒲葵子有效成分进行提取与粗分，用MTT体外药效筛选结果表明，乙酸乙酯效果明显，即采用聚酰胺层析法，得到黄酮类。2.黄酮类进行临床前安全性评价结果：①急性毒性实验。有效成分毒性较小，MTD大于11g/kg。②长期毒性实验。给药13周后，各组织器官无异常改变，血液检查与生化指标正常。停药4周后，各组织器官亦正常。大体解剖未发现异常。③遗传毒性实验：微量波动试验，各浓度受试物无论加S9或不加S9，各板中变色孔数经X2检验，与阴性对照组相比，无显著性差异（P>0.05）；与阳性对照组相比，有显著性差异（P<0.001）。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，雌、雄各给药组与阴性对照组相比，无显著性差异（P>0.05）；与阳性对照组相比，有显著性差异（P<0.05）。　　结论：急性毒性、长期毒性、遗传毒性三个方面毒理学安全性试验结果表明蒲葵子抗癌有效部位在所设剂量下无急性毒性，无长期毒性，致突变作用。