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研究背景： F12基因位于5号染色体长臂，其编码蛋白质为凝血因子Ⅻ，全长为615个氨基酸，是内源凝血途径的始动因子。近年来的研究表明，靶向抑制凝血因子Ⅻ可以有效延缓血栓形成，或可替代传统抗凝药物用于血栓性疾病的防治。目前关于以腺相关病毒为载体靶向凝血因子Ⅻ的shRNA在抗血栓方面的研究仍处于空白阶段，其效果与安全性尚需评估。 目的： 1.通过Invitrogens RNAi Designer软件设计两条经BLAST验证的靶向C57BL/6小鼠F12基因mRNA的短发卡RNA（shRNA）。 2.通过小鼠活体实验，研究腺相关病毒介导靶向凝血因子Ⅻ的 shRNA 在抑制FⅫ表达和抗血栓方面的作用。 方法： 1.shRNA设计及腺相关病毒包装；通过Invitrogens RNAi Designer软件设计两条靶向C57BL/6小鼠F12基因mRNA的shRNA：F12-shRNA1、F12-shRNA2然后通过腺相关病毒包装系统得到分别表达F12-shRNA1、F12-shRNA2以及NC （nc-shRNA）空载的三种携带绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的腺相关病毒。 2.将6-8周小鼠随机分组，分为shRNA1、shRNA2、NC和对照（Control）四组，通过尾静脉分别注射上述三种病毒与磷酸盐缓冲液（PBS）。正常饲养21天后，获取各组小鼠肝脏用于q-PCR、Western blot及荧光检测，小鼠血浆用于APTT 以及凝血因子Ⅻ活性和含量检测，以此来评估病毒感染效率以及 shRNA的敲低效果。 3.通过三氯化铁化学诱导法和血管狭窄法分别诱导小鼠动、静脉血栓形成，比较上述四组小鼠在血栓形成能力方面的差异。 4.对于上述实验效果最好的一组，检测小鼠出血时间、组织HE染色和血浆生化指标，比较其与Control组有无差异，评估腺相关病毒介导shRNA对小鼠有无出血风险和毒性反应。 结果： 1.成功获得了表达靶向F12基因的shRNA和空载的腺相关病毒，经测定滴度达到1.5×1012 PFU/ml。 2.三组病毒小鼠肝脏均存在较强绿色荧光信号，shRNA1与shRNA2组在肝脏 mRNA 和蛋白质水平上均有明显下降；血浆 FⅫ活性和含量结果显示两组小鼠FⅫ均有不同程度降低，而APTT检测仅有shRNA2组具有明显改变。 3.HE 染色显示 shRNA1 在动、静脉血栓模型中均有血栓形成，而 shRNA2组均无，在mRNA水平上，两组PF4表达量均下降，而PECAM-1仅有shRNA2发生变化。 4.shRNA2组小鼠出血时间与Control组无明显差异，组织HE染色与血浆生化结果显示腺相关病毒对小鼠脏器无显著的毒性作用。 结论： 1.找到了对小鼠F12基因表达有明显抑制作用的shRNA2序列且以腺相关病毒为载体的shRNA仍具有很好的敲低效果。 2.小鼠活体实验证明腺相关病毒介导靶向凝血因子Ⅻ的shRNA2对血栓形成有明显抑制作用，并且无明显的副作用。 3.小鼠血栓形成实验的结果可为临床应对血栓性疾病寻找一种长期、稳定、安全的治疗方案提供一种新的方向。