【摘 要】
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艾滋病的致病机理仍有许多问题尚待进一步研究,基因组的高度变异,耐药毒株的出现,给该病的治疗带来极大困难.截止目前为止,所有治疗手段的效果均不能令人满意.为客观地评价药
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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艾滋病的致病机理仍有许多问题尚待进一步研究,基因组的高度变异,耐药毒株的出现,给该病的治疗带来极大困难.截止目前为止,所有治疗手段的效果均不能令人满意.为客观地评价药物的治疗反应,探讨其致病机理,该研究应用分子克隆和PCR技术等现代分子生物学手段,以gag基因为靶序列,对艾滋病的致病因子-人类免疫缺陷病毒(HIV)进行了定量方法学和分子流行病学的研究.首先采用重组PCR技术合成用于定量PCR反应的HIV-1 gag基因的内参照标准片段,使其内部形成缺失50bp的突变,然后将其与阳性对照片段纯化后克隆入质粒载体PCRⅡ中,获得高质量的竞争模板,将一定量的阳性对照与浓度梯度稀释的竞争模板在同一反应体系中进行PCR扩增,建立稳定的定量竞争PCR(QC-PCR)方法.采集8例艾滋病患者(或HIV感染者)外周血单个核细胞(PBMC)标本、用尿素-SDS裂解细胞后,经酚:氯仿抽提,提取细胞总DNA,用QC-PCR方法对这些DNA标本进行验证,结果证实该方法非常适合于典型的临床标本,该研究用QC-PCR方法可检测到10个拷贝的前病毒DNA.同时作者还采用差别PCR(D-PCR)方法对该8例标本进行检测,用单拷贝顺序基因β-珠蛋白(β-Globin)与HIV-1 gag基因共同扩增,结果表明这种D-PCR方法较为简便,与QC-PCR具有较好的一致性.
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