苍术素诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡的实验研究

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目的:  探讨苍术素(Atractylodin)抑制人胃癌MKN-45细胞增殖的作用及其作用机制,为研发新型抗肿瘤药物提供实验依据和理论基础。  方法:  1.倒置显微镜观察苍术素对MKN-45细胞形态的影响;MTT法测定苍术素诱导MKN-45细胞半数致死的药物浓度和时间。  2.荧光显微镜结合Hoechst33258/PI染色观察苍术素对MKN-45细胞凋亡形态的影响。  3.流式细胞仪结合PI染色和Annexin V/PI染色检测苍术素对MKN-45细胞的细胞周期的影响及细胞凋亡率。  4.Western blot法检测经苍术素处理后MKN-45细胞相关凋亡蛋白表达的变化。  5.液相芯片法检测苍术素对MKN-45细胞分泌相关细胞因子的影响。  结果:  1.不同浓度苍术素作用于MKN-45细胞后,浓度在5mg/L和10mg/L时促进细胞增殖;浓度大于20mg/L时,抑制细胞增殖,且抑制作用呈时间和浓度依赖性。  2.光镜和荧光显微镜下可见经浓度大于20mg/L的苍术素处理12h后的细胞出现细胞凋亡的形态学特征。  3.流式细胞仪结果可见MKN-45细胞的细胞周期停滞在G1期,凋亡细胞数量随时间和浓度的增加而增多。  4.Western blot结果显示经苍术素处理后,MKN-45细胞的PARP-1的表达量明显增高,AIF被激活;caspase3、caspase8和caspase9未被激活,caspase3和caspase9前体蛋白表达量不变。  5.液相芯片结果表明,苍术素抑制MKN-45细胞分泌IL-6、TNF-α、IL-10和IL-12p70,诱导细胞分泌IL-7和IL-1β。  结论:  本研究结果显示,苍术素抑制MKN-45细胞增殖,且抑制作用呈时间和浓度依赖性。苍术素通过阻断细胞周期、使细胞周期停滞在G1期,经由非依赖caspase的PARP-1/AIF信号通路诱导细胞凋亡和影响细胞相关细胞因子的分泌来抑制MKN-45细胞的增殖。
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