论文部分内容阅读
目的:近年来,外源性阿片类物质的滥用已成为全球范围内严重的社会问题。女性阿片类依赖者最普遍的损害体现在生殖内分泌系统,资料显示,其作用机制为阿片类药物通过抑制下丘脑-垂体-卵巢轴的功能,雌、孕激素水平低下,导致闭经、不孕,乳腺萎陷等。吗啡属外源性阿片类物质,本研究以人正常乳腺细胞作为研究对象,探讨吗啡是否可以直接影响雌激素对人乳腺细胞的作用,以及是否可以剂量依赖性下调人乳腺细胞的ERmRNA的表达,进而为研究阿片类药物依赖和戒断症状的病因及治疗提供依据和思路。材料及方法:购买人正常乳腺纤维细胞株进行培养,将培养好的细胞分为六组,第一组是17-β雌二醇（E2）组(终浓度为1×10-8mol/L);第二组是17-β雌二醇+吗啡（E+Mor）组(终浓度均为1×10-5mol/L);第三组是17-β雌二醇+吗啡+纳络酮（E+M+N）组(提前加入纳络酮孵育1小时,再加入吗啡和17-β雌二醇,终浓度为10-5mol/L);第四组是吗啡组(又分为10-4mol/L,10-5mol/L,10-6mol/L)第五组是吗啡+纳络酮（M+N）组(提前加入纳络酮孵育1小时,再加入吗啡,终浓度为10-5mol/L)第六组是对照组。观察细胞的生长增生情况;并通过RT-PCR的方法,利用样本与actin的灰度比值,计算出ERmRNA的含量,用SPSS13.0统计软件进行方差分析和对数线性相关分析,生长曲线用SAS9.0下的Mixed程序分析,以α=0.05为检验水准。结果:（一）细胞生长增生情况:第一代传代的乳腺细胞各组接种密度间比较,差异无显著性（P＞0.05）。接种用药第2、4、6、8、天进行细胞计数,雌激素组细胞数较对照组增加,雌激素+吗啡（E2+MOr）组细胞数较雌激素组降低,差异有显著性（P＜0.001）。雌激素+吗啡+纳络酮组（E2+Mor+N）与雌激素（E2）组比较,差异无显著性（P＞0.05）。（二）计算ERmRNA的含量:ER与内参照β-actin分别在249 bp和270bp处出现特征性条带。雌激素组、吗啡组与对照组比较,差异有显著性（P＜0.001）,吗啡作用24 h呈剂量依赖性抑制乳腺细胞ERmRNA的表达,3组吗啡的终浓度分别为1×10-6mol/L、1×10-5mol/L、1×10-4mol/L,经对数线性相关分析,r=-0.8648差异有显著性（P＜0.001）。E2+Mor组与对照组比较,差异无显著性（P＞0.05）。结论:从mRNA水平证明了外源性阿片类药物吗啡可直接影响雌激素对乳腺的促增生作用,同时还可剂量依赖性下调ERmRNA的表达。而这种作用可被特异性阿片受体拮抗剂纳络酮所阻断。