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本项研究中,我们选择了剪接情况比较特别的KChIP4亚家族基因作为研究对象。利用生物信息学分析方法,对人类KChIP4基因的结构、外显子剪接情况、序列编码进行了详尽分析。利用在线启动子预测软件对基因所在的gDNA序列区间进行了全程的启动子预测扫描。综合上述结果的基础上,以5-RACE实验方法及引物延伸技术,对基因的转录起始位点进行确定。通过启动子活性分析,我们分离了KChIP4基因中的四个启动子区域,即p520、p221、p181和p183启动子区域。经对分离片段进行活性分析,发现p520和p183两条片段在HT1080细胞和原代神经元细胞中均具有一定的转录启动活性。同时,对p520启动子区域中的顺式结构元件进行初步鉴定和分析,并对Sp1转录因子对起始转录的影响进行了初步分析。
为了深入研究KChIP4基因的转录水平调控研究,选择了p520启动子作为进一步研究的对象,对核心启动子区域及顺式结构元件进行了分离和鉴定。我们设计了一系列位点突变,并将突变位点引入pCAT3--247/+17质粒中。同时以Sp1的强抑制剂WP631对-247/+17片段活性的影响进行研究。实验结果表明,Sp1转录因子对KChIP4基因转录过程起着重要的影响。综上所述,上述结论将为进一步深入研究KChIP4基因的表达调控通路奠定基础。