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目的: 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）症状的主要特征性标志：脑组织病理改变为神经炎性斑或老年斑（senile plaques，主要为淀粉样肽Aβ）的形成和异常tau蛋白过度磷酸化的聚集（神经纤维缠结，NTFs）。神经元的细胞骨架主要由细胞内的三种蛋白纤维丝的网状结构构成，主要是微管、微丝、中间纤维，肌动蛋白actin则是微丝的主要成分。而微管的聚合、稳定和组装由微管相关蛋白（Microtubule-associated proteins，MAPs）调控,如MAP1，MAP2，MAP4，tau等蛋白。淀粉前体蛋白-C端片段（Amyloid Precursor Protein-C Terminal Fragment，APP-CTFs）在AD病发病机制中起重要作用。APP通过β-分泌酶酶解后在细胞内产生APP-CT99，APP-CT99再通过γ-分泌酶裂解后产生APP-CT57。为了研究淀粉样前体蛋白C端片段是否会影响细胞结构蛋白的状态，本实验选择了肌动蛋白、微管相关蛋白等蛋白作为指标，来观察淀粉样前体蛋白C端片段对细胞骨架中结构蛋白的影响。 实验方法: 1.胎鼠皮层神经元细胞培养本实验选用怀孕16～18天的SD大鼠的胎鼠皮层神经元细胞，CO2培养箱培养7天。 2.APP/APLP2-CTFs扩增与提取分别将含有重组质粒 pEGFP-N1-APP（APLP2）-CTFs（CT99，CT57）和空载体pEGFP-N1的菌种用含Kan+培养基扩增培养。按照质粒大量提取试剂盒说明提取、纯化质粒。 3.细胞转染使用LipofectamineTM2000转染试剂盒将APP/APLP2-C端片段转染到皮层神经元细胞中，对照组转染空载体 GFP，荧光显微镜下观察转染的情况。 4.免疫组化实验观察转染APP-CTFs到神经元后对F-actin、MAP2和Tubulin的影响。 5.蛋白印迹实验观察转染 APP/APLP2-CTFs和它们 YENPTY段删除的CTFs后的Ph-cofilin的蛋白表达水平，以及处理DAPT组与未处理组的Ph-cofilin蛋白表达水平。 结果: 1．APP/APLP2-CTFs转染组与对照组相比荧光显微镜下发现向细胞向外伸展的F-actin的重新聚合，而对照组细胞四周的伸出的突触却有所收缩，免疫组化结果显示Ph-cofilin在细胞内表达有所增高；Western Blotting结果显示两者的Ph-cofilin表达也有所增高（P<0.05）。 2．APP/APLP2-CTFs转染组与对照组相比，细胞内部的Tubulin蛋白表达发生紊乱。 3．APP/APLP2-CTFs转染组与对照组相比，轴突当中的MAP2蛋白的表达显著减弱，而且APP-C99组的MAP2蛋白的表达水平最低。 4．加入DAPT处理与为处理组相比，减缓了转染APP-CTFs后产生Ph-Cofilin的影响（P＜0.05）。 5．转染 APP-CTFs的细胞与其 YENPTY段删除组相比，Ph-cofilin蛋白表达水平均增高，与空载体转染组比较具有显著性差异（P<0.05）。 结论: APP-C端片段可以改变神经元细胞骨架的F-actin、Tubulin、MAP2等蛋白而影响其骨架状态。