【摘 要】
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以质粒pKT230为载体,亚克隆大豆根瘤菌吸氢酶结构基因(hupSL)5.9kbHindIII 片段构建成嵌合质粒pKH1.将质粒分配系统基因(parDE)片段和吸氢酶结构基因(hupSL)片段插入载体质粒
【出 处】
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中国科学院上海植物生理研究所 中国科学院上海植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学
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以质粒pKT230为载体,亚克隆大豆根瘤菌吸氢酶结构基因(hupSL)5.9kbHindIII 片段构建成嵌合质粒pKH1.将质粒分配系统基因(parDE)片段和吸氢酶结构基因(hupSL)片段插入载体质粒pRK415,构建成质粒pRKBH.质粒pKH1、pRKBH和载体pRD415经转化和三亲本杂交,得到DH5α/pHR11、DH5α/pRKBH、E1201/pKH1(EH981)、NG1390/pRK415、NG1390/pHR11、NG1390/pRKBH、NG13/pKH1(NGH999)和NG1390/pKH1(NGH982)等接合子.稳定性分析发现,质粒pKH1在催娩克氏杆菌中传80代后仍有92﹪以上的菌株含此质粒,说明质粒pKH1有较高的稳定性.菌体在生长到对数期末,吸氢酶活性表达达到峰值,酶活性分析表明, H<,2>诱导接合子EH981、NGH999和NGH982具有耐铵的特性,其固氮酶活性的表达有部分去铵阻遏的作用. 工程菌NGH982在pH中性到微碱和30℃左右的生态条件下固氮酶和吸氢酶活性可达到最大值.
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