【摘 要】
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植物病害的防治主要有化学防治与生物防治,尽管化学防治具有广谱、高效的特点,但随之引发的环境问题也十分严重,鉴于人们对食品安全的关注,生物防治已成为研究热点。桃色顶孢霉是本实验室从土壤中分离到的一株拮抗真菌,前期实验已证明其代谢物对多种植物病害均有较强的拮抗能力（已获得专利）,且初步断定其抑菌活性物质为蛋白质。本实验以大豆根腐病茄病镰孢菌（Fusariun solani）及玉米圆斑病炭色长蠕孢菌（B
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植物病害的防治主要有化学防治与生物防治,尽管化学防治具有广谱、高效的特点,但随之引发的环境问题也十分严重,鉴于人们对食品安全的关注,生物防治已成为研究热点。桃色顶孢霉是本实验室从土壤中分离到的一株拮抗真菌,前期实验已证明其代谢物对多种植物病害均有较强的拮抗能力（已获得专利）,且初步断定其抑菌活性物质为蛋白质。本实验以大豆根腐病茄病镰孢菌（Fusariun solani）及玉米圆斑病炭色长蠕孢菌（Bipolaris carbonum）为供试病原菌,对该菌株的抑菌活性蛋白进行了分离,并对粗蛋白的抑菌机理与应用进行了初步研究,为更好地开发利用该菌株提供技术支持与理论依据。采用硫酸铵分级沉淀与凝胶过滤层析相结合的方法对代谢物中的抑菌活性蛋白进行分离、纯化,通过管碟法检测抑菌蛋白活性、SDS-PAGE纯度检测及质谱分析,证实桃色顶孢霉中所含的抑菌物质为一个大小约为15k Da的小分子蛋白,利用数据库比对,并未找到与之同源的蛋白。对粗蛋白的稳定性研究结果表明:该菌株代谢物提取的粗蛋白对于温度变化不敏感,121℃下加热30min仍能保持较高抑菌活性;而pH对其影响较大,在强酸或强碱条件下均无抑菌活性,在pH6.0时抑菌活性最强;利用粗蛋白处理茄病镰孢菌孢子后,通过显微镜观察发现,经抑菌蛋白处理的镰刀菌孢子随着处理时间的延长芽管发生钝化,不能正常生长,粗蛋白体积浓度为90%时,孢子萌发率仅为15.6%;而粗蛋白处理镰刀菌菌丝体后,菌丝细胞内电解质外渗,电导率升高,菌体内三种抗氧化酶在96h内变化趋势一致,均为先升高后下降,在24h时三种抗氧化酶活性最高,在96h时降至最低,证实抑菌蛋白会导致病原菌细胞膜通透性改变,细胞内容物外渗,菌体死亡。以大豆为研究材料,利用盆栽实验,测定不同土壤处理中大豆苗期叶片与根系三种抗氧化酶活性,探究桃色顶孢霉粗蛋白的应用方式与前景。结果表明:与正常土壤相比,添加桃色顶孢霉粗蛋白不会诱导大豆叶片及根部提高POD、CAT活性,但可以在一定程度上提高SOD活性;分别在正常土壤和施加顶孢霉粗蛋白的土壤中栽种的大豆叶片上接种大豆菌核病核盘菌后,测定接菌后叶片三种抗氧化酶活性变化表明:土壤中施加顶孢霉粗蛋白的处理,叶片接种病原菌可以提高大豆SOD活性,但对POD、CAT没有诱导作用,此结果与土壤处理后根部与叶部变化较为一致。
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