人尿中维生素A、维生素B<,2>及其代谢物的研究

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代谢组学是一门新兴的学科,是对某一生物或细胞在一特定生理时期内所有低分子量代谢产物同时进行定性和定量分析的学科。代谢组学的发展对药效的评价,测量药物的毒副作用的大小以及对新药的研究和开发都有很大的指导作用。 在本文第一章绪论,介绍了研究代谢组的方法和药物代谢的研究进展,重点介绍了研究代谢组的检测技术以及其优缺点;在第二章中用液质联用的方法检测了人尿中维生素A的主要代谢物;在第三章中用高效液相研究了维生素B2在人尿中的含量;第四章总结了本文的主要结论及提出今后代谢组的研究方向。本文的主要工作和取得的主要成果如下: 1、利用液相色谱-质谱联用方法成功地检测了人体服用过量的维生素A后排泄到尿样中的代谢物。采用C18固相萃取的前处理方法,以维生素A的结构类似物-视黄醇来考察样品的流速、甲醇洗脱剂的用量等因素对萃取效果的影响。在样品流速0.5mL/min、甲醇洗脱剂的用量为1.0mL时,视黄醇的固相萃取效率达93%。取20μL经C18固相萃取后的服药尿样进行液相色谱-质谱联用,以甲醇和0.01mol/L醋酸铵为流动相,有机配比在70%-90%之间,梯度洗脱,紫外检测波长为325 nm,大气压化学电离,负离子模式,质谱采集范围200-800检测出维生素A的四种主要代谢物,它们分别是视黄醇硫酸酯、4-羟基视黄酸与硫酸结合物、4-羟基视黄酸和3-脱氢视黄酸葡萄糖苷酸。 2、用高效液相色谱检测了人体服用过量的维生素B2后的尿样与空白尿样,两者相比发现只明显多出原药峰。用C18固相萃取作为前处理方法,考察了样品的流速、甲醇洗脱剂的用量对维生素B2萃取效果的影响,在样品流速为0.5mL/min、甲醇洗脱剂的用量为1.0mL取得的回收率达98.6%。以乙腈和0.01mol/L醋酸铵为流动相,有机配比在5%-40%之间,梯度洗脱,紫外波长设在267nm。考察了各种影响,在最佳条件下获得该方法的线性方程:A=4094+1.34×108C(g/1),线性相关系数达到0.9995,在8.0×10-3~2.0x10-2g/L,浓度水平范围内的平均回收率在91.2%-96.7%之间,用该方法测定了人体服用维生素B2后排泄到尿样中的含量。
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