【摘 要】
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在建立了小黑杨花粉植株再生优化组培体系：分化培养基为MH+BA0.1 mg／L+NAA0.05mg／L，生根培养基为MH+IBA0.4mg／L的基础上进行遗传转化。 确定农杆菌介导的小黑杨遗传转化体系：在
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在建立了小黑杨花粉植株再生优化组培体系：分化培养基为MH+BA0.1 mg／L+NAA0.05mg／L，生根培养基为MH+IBA0.4mg／L的基础上进行遗传转化。 确定农杆菌介导的小黑杨遗传转化体系：在上述分化培养基和生根培养基的基础上进行遗传转化：叶片预培养2～3d后，进行侵染；工程菌液OD600=0.3～0.5，浸泡时间为5min，25℃，置暗处共培养2～4d；转入含卡那霉素浓度为40mg／L的选择培养基上，进行选择培养，同时用浓度700mg／L的头孢唑林钠对叶片进行脱菌：得到卡那霉素抗性芽后，在生根培养基上进行生根培养（含有40mg／L卡那霉素，700mg／L头孢唑林钠）。 在建立小黑杨花粉植株遗传转化体系基础上，利用农杆菌介导法向小黑杨植株基因组中导入抗虫基因（蜘蛛杀虫肽与Bt基因C末端肽序列连接在一起表达的一种融合蛋白基因），获得3个转化无性系，转化率为0.62％，GUS表达阳性率为75％，并对其进行分子生物学检测和饲虫试验。 卡那霉素抗性植株的分子生物学检测表明，PCR检测阳性率均为100％，Southern斑点杂交阳性率34％，转基因植株目的基因的PCR-Southern杂交阳性率为100％。说明外源基因已稳定整合到小黑杨花粉基因组中。 转基因小黑杨的虫饲试验表明，接舞毒蛾2龄幼虫，杀虫率达62.5％～92.5％，阴性对照植株虫饲死亡率5％～13.3％，阳性植株饲喂舞毒蛾死亡率高于阴性对照植株饲喂舞毒蛾死亡率，而且集中在饲虫初期，说明基因表达产物水平较高。咬食转基因植株的尚存活舞毒蛾平均虫体重增加缓慢，对照体重为处理体重的2.8倍与12.9倍，外源基因严重抑制幼虫的生长。说明外源基因在转基因小黑杨中能够正常表达，转基因植株表现一定的抗虫性。 通过分子生物学检测和转基因植株的饲虫试验，充分说明了外源基因（融合基因）已稳定整合到小黑杨基因组中，而且能够正常表达。
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