乙醛脱氢酶1用于乳腺癌干细胞的检测及其生物学特性分析

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背景及目的:目前认为乳腺癌可能是一种干细胞疾病,源自体内少数具有自我更新和多向分化潜能的肿瘤干细胞。但因缺乏简单的特异性干细胞标记物,使其研究大受限制。因此,近年来寻找乳腺癌干细胞标记物是当前乳腺癌干细胞研究的热点。目前多数研究认为CD44+/CD24-/low表型是乳腺癌干细胞的特异性表面标记物,而乙醛脱氢酶1(ALDH1)活性是一通用的干细胞功能性标记物。本研究的目的即是探讨ALDH1用于分选鉴定乳腺癌干细胞的可行性,分析ALDH1+和CD44+/CD24-/loW两群乳腺癌细胞的生物学特性,着重分析这两种细胞亚群之间的差异和是否存在交叉重叠现象,以及研究ALDH1+CD44+/CD24-/low群细胞的干细胞特性,并对乳腺癌组织及其对应的复发转移灶中ALDH1蛋白的表达是否发生变化进行分析。方法:1.通过流式分选技术,从新鲜乳腺癌组织原代培养肿瘤细胞中分选CD44+/CD24/low、ALDH1+和ALDH1+CD44+/CD24-/low细胞亚群,分析各分选细胞占总肿瘤细胞的比例;2.通过克隆形成、细胞增殖实验、transwell、免疫荧光实验观察各组细胞的自我更新、增殖和侵袭能力;3.通过裸鼠致瘤试验观察各组细胞的致瘤能力。4.应用免疫组化的方法,回顾性分析87例乳腺癌标本中ALDH1蛋白的表达,并分析与对应的复发转移灶中,ALDH1蛋白的表达变化。结果:对原代培养乳腺癌细胞进行流式分选后发现,CD44+/CD24-/low细胞占总细胞比例为7.2%;ALDH1+细胞的比例为4.6%;ALDH1+CD44+/CD24-/low细胞占比为1.5%。三组细胞均具有干细胞特性,其自我更新、增殖、侵袭及致瘤能力由强至弱依次为ALDH1+CD44+/CD24-/low、ALDH1+细胞、CD44+/CD24-/low细胞。ALDH1蛋白在原发乳腺癌标本中的表达比例为28.7%,在对应的复发转移灶中表达的比例为43.7%,有显著性差异。结论:1.乳腺癌中存在CD44+/CD24/low、ALDH1+和ALDH1+CD44+/CD24-/low细胞亚群,均具有自我更新、高增殖、侵袭及致瘤能力,但ALDH1+CD44+/CD24-/low细胞亚群的自我更新、增殖、侵袭及致瘤能力最强,证明此群细胞具有更强的干细胞特性,ALDH1可作为可靠的乳腺癌干细胞标志物用于乳腺癌干细胞的检测。联合运用CD44+/CD24-/low和ALDH1可更特异性的鉴定、分选乳腺癌干细胞。2.乳腺癌复发转移灶中乙醛脱氢酶1的表达率明显高于对应的原发灶,提示ALDH1+乳腺癌干细胞可能参与乳腺癌的复发转移。
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