【摘 要】
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该研究试图建立骨生成素-4在毕赤酵母Pichia pastoris中的表达技术.主要研究工作包括：将骨生成素-4全长cDNA的成熟片段克隆到分泌型表达载体质粒pPIC9K多克隆位点上,构建能表
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该研究试图建立骨生成素-4在毕赤酵母Pichia pastoris中的表达技术.主要研究工作包括：将骨生成素-4全长cDNA的成熟片段克隆到分泌型表达载体质粒pPIC9K多克隆位点上,构建能表达人骨生成素-4的载体质粒.经转化酵母宿主菌株GS115和KM71,筛选多拷贝整合转化子,PCR鉴定基因整合后,摇瓶培养,用甲醇诱导表达.实验结果表明,表达产物经蛋白质免疫印迹和定量点杂交分析证实表达产物具有良好的抗原性和特异性,在蛋白电泳分析结果发现表达的hBMP4的蛋白分子量为43,000dalton.摇瓶培养诱导表达量达到29.82mg/ml,占上清中总蛋白的11.9﹪.此外,该研究利用PCR定点突变技术对骨生成素-4基因中的2个在酵母细胞中使用频率为“0”的CGC精氨酸密码子进行改造,使之成为酵母细胞嗜好的使用频率为“86.6﹪”.AGA精氨酸密码子,以期达到提高hBMP-4在酵母系统中表达水平的目的.
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