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内蒙古阿尔巴斯绒山羊所产羊绒是高档纺织品原材料,经济价值极高,有“软黄金”之称。绒山羊毛囊（hair follicle,HF）分为初级毛囊和次级毛囊,初级毛囊产粗毛,次级毛囊产羊绒。次级毛囊具有年度循环周期性,每年有三个阶段,分别为8-10月的生长期,12月-次年2月的退行期以及2-7月的休止期。毛乳头细胞（dermal papilla cells,DPCs）聚集于毛囊底部,是调控毛囊循环周期以及毛发生长的关键细胞之一。连接蛋白40（connexin 40,Cx40）属于缝隙连接蛋白家族的成员,分子量为40k Da,可调控缝隙连接通道（gap junction channels,GJCs）,而GJCs最重要的功能之一是亲水性小分子、原子和离子在细胞间直接通讯。通过高通量转录组测序得到的次级毛囊生长期与休止期差异表达的基因中,Cx40存在明显差异,在生长期的表达远高于休止期,这说明该分子在毛囊生长发育过程中发挥了重要作用。毛乳头细胞位于毛囊基底部,其增殖情况与毛囊生长发育密切相关。因此,本实验旨在研究Cx40对绒山羊毛乳头细胞增殖的影响。本研究从三个方面展开,实验材料为阿尔巴斯绒山羊的背部皮肤组织以及初级毛乳头细胞（primary dermal papilla cells,PHF-DPCs）和次级毛乳头细胞（secondary dermal papilla cells,SHF-DPCs）,具体如下:1、绒山羊毛囊形态观察及毛乳头细胞的培养鉴定采集绒山羊背部皮肤组织样本,制备石蜡切片,并进行HE染色,结果显示,生长期毛囊的数量多于休止期,且毛球形态较休止期膨大饱满。用含10%FBS的DMEM/F12培养液培养细胞,观察其24h、48h、72h的状态,结果显示,DPCs的生长有凝集现象,SHF-DPCs的生长速度快于PHF-DPCs。为检测实验使用细胞的准确性,用DPCs表面特异性标记蛋白α-SMA和Lam进行免疫荧光检测,结果为阳性。2、正反调控Cx40对绒山羊毛乳头细胞增殖的影响在细胞模型制备方面,用Lipofectamine?2000 Reagent将Cx40过表达载体和干扰载体分别转染于PHF-DPCs和SHF-DPCs中,提取c DNA和蛋白样品,实时定量PCR和Western Blot检测Cx40的m RNA和蛋白表达量。结果表明,转染过表达载体DPCs的Cx40 m RNA和蛋白表达量增高,转染干扰载体DPCs的Cx40 m RNA和蛋白表达量降低;先转染干扰载体于DPCs中,再转染过表达载体进行rescue挽救实验,结果显示Cx40的m RNA和蛋白表达量有所回升,说明成功构建了过表达和干扰Cx40 DPCs模型。在增殖能力检测方面,用CCK-8和Ed U增殖检测法来研究Cx40对PHF-DPCs和SHF-DPCs增殖的影响。结果表明,转染Cx40过表达载体的DPCs较对照增殖增多,转染Cx40干扰载体的DPCs较对照增殖减少,rescue实验的DPCs增殖有回升。说明Cx40正向调控DPCs的增殖。3、Cx40调控绒山羊毛乳头细胞的信号通路的研究本研究选取PI3K/AKT、ERK/MAPK和p38/MAPK三条与细胞生长、分化、增殖与迁移等活动紧密相关的信号通路,检测Cx40对其的影响。结果表明,Cx40可能通过提高AKT、ERK和p38通路的磷酸化水平来实现DPCs的增殖。上述结果表明:Cx40正向调控PHF-DPCs和SHF-DPCs的增殖来促进毛囊的发育,这一作用可能与其增加AKT、ERK和p38信号通路的磷酸化水平有关。