论文部分内容阅读
目的1.了解杭州地区尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒基因型(HPV)的分布情况。2.探讨尖锐湿疣(CA)患者免疫功能的状况以及光动力治疗对其免疫系统的影响作用。方法1.应用PCR-反向斑点杂交试验检测杭州地区190例尖锐湿疣患者宫颈和/或外阴、肛周、尿道口的人乳头瘤病毒基因型。2.应用流式细胞仪检测36例尖锐湿疣患者(其中23例经3次ALA-PDT治疗后再次进行检测)及24例健康对照人群的T细胞亚群,33例尖锐湿疣患者(其中25例经3次ALA-PDT治疗后再次进行检测)及26例健康对照者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的百分比；采用免疫组化的方法检测10例尖锐湿疣患者(其中7例经3次ALA-PDT治疗后再次取材检测)皮损中CD4, CD8, FOXP3, PD-1, PD-L1, CCL20, E-cadherin的表达情况。应用SPSS19.0统计软件进行统计学处理。结果1.190例尖锐湿疣患者,共检测224个部位(34例同时检测2个部位)。其中150例(78.95%)包括173处(77.23%)检测到HPV阳性。107处为单一感染(61.85%),66处多重感染(38.15%)。尿道口皮损的阳性检出率较低,与其他部位相比差异有统计学意义(p<0.05)。单一低危型HPV在宫颈阳性患者中的检出率明显低于尿道口阳性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。120例宫颈检测的患者,其外阴均可见CA皮损。其中10例患者同时存在宫颈肉眼可见的疣体,另110例宫颈无肉眼可见疣体的患者中85例(77.27%)HPV阳性。HPV基因型检出率从高到低依次为HPV-6(61,21.86%)、11(55,19.71%)、16(36,12.90%)、52(20,7.17%)、18(17,6.09%)、58(16,5.73%)、53和CP8304(14,5.02%),其余的12种基因型检出次数均小于10,HPV-35未检测到。宫颈部位HPV-6检出率明显低于肛周,HPV-11明显低于尿道口,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈高危型HPV检出率明显高于尿道口,差异有统计学意义(P<0.05),而与其他部位相比差异无统计学意义(P>0.05)。2.外周血T细胞亚群检测显示CA患者治疗前CD4+T细胞的百分比明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01),治疗后百分比增加,与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CA治疗后CD8+T细胞百分比较治疗前下降,略高于健康对照组,三者之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。CA患者治疗前CD4/CD8比值明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01),经ALA-PDT治疗后CD4/CD8比值增高,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后CD4/CD8比值虽然仍低于健康对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。CA组患者ALA-PDT治疗前和治疗后外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞占CD4+CD25+T细胞的百分比均明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)；与治疗前相比,治疗后CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的百分比增高,但两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。25例CA患者ALA-PDT治疗3次后予以随访3个月,其中8例患者皮疹复发,17例皮疹未复发。复发组CA患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比未复发组患者高,两者之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。3.CA患者治疗前的皮损组织中CD4阳性表达高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；CD8阳性表达亦高于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)；CD4/CD8比值较正常对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。经3次ALA-PDT治疗后CA皮损中CD4和CD8的阳性表达较治疗前有所下调,但差异无统计学意义(P>0.05)。然而CD4/CD8比值有明显增加,与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后CCL20的表达明显上调,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。Foxp3、PD-1、PD-L1及E-cadherin的表达在CA皮损治疗前后及与正常对照皮肤比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论1.杭州地区CA患者HPV检出率高达77.23%。HPV感染形式包括单一感染和多重感染(2～6种基因型),以前者为主。CA患者可出现多部位如宫颈外阴HPV基因型交叉感染。宫颈无疣体的女性CA患者中宫颈HPV感染率高达77.27%,因此无论是否伴有宫颈皮损,均应常规进行宫颈HPV的检测和随访,并积极治疗。2.CA患者治疗前外周血中CD4+T细胞百分比和CD4/CD8比值低于健康对照组,CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞百分比高于健康对照组；皮损组织中CD4表达高于健康对照组,但CD4/CD8比值低于健康对照组。提示患者存在免疫功能异常,处于免疫失衡状态。ALA-PDT治疗后外周血及皮损组织中CD4/CD8比值较治疗前明显增加,角质形成细胞中CCL20表达上调。表明ALA-PDT有助于CA患者失衡的免疫功能得以纠正,以利皮损的消退。