中药复方对ITP模型小鼠细胞因子及Bcl-2、TPO含量的影响

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目的:免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)是一种因自身免疫异常导致的出血性疾病,具有病程绵长,反复难愈的特点,我们在临床研究中发现,慢性ITP病人多有“正虚邪实”的病机特点,临床以气虚不摄型及阴虚内热型最为常见。本研究应用双抗体夹心酶联免疫法(ABC-ELISA法)测定了中药复方补气消癜汤及养阴消癜汤对ITP模型小鼠血清IL-2、IL-6、IL-10、TGF-β1、TNF-α及凋亡抑制基因Bcl-2蛋白含量及促血小板生成素(TPO)的影响,为探讨中药复方治疗ITP的作用机制及临床用药提供依据。方法:1.采用腹腔注射豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)的免疫造模方法,建立BALB/C小鼠ITP的模型,通过检测血小板计数、计算脾脏系数、计数骨髓巨核细胞总数及产板巨核细胞数,进行模型评价。2.将72只BALB/C小鼠随机分为6组,分别为正常对照组、模型对照组、泼尼松组、维血宁组、中药1组(补气消癜汤组)、中药2组(养阴消癜汤组),观察了治疗后ITP模型小鼠一般状况的改善、脾脏组织病理形态、脾脏系数、外周血血小板计数、骨髓巨核细胞总数、产板巨核细胞数的变化。3.采用双抗体夹心ABC-ELISA法分别检测六组小鼠血清细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、TGF-β1、TNF-α含量、凋亡抑制基因Bcl-2蛋白含量及血清TPO浓度的变化。结果:1.采用抗小鼠血小板血清(APS)法建立动物模型后,模型小鼠出现外周血血小板明显降低,脾脏增大,骨髓巨核细胞总数明显增多,产板巨核明显减少,符合人类ITP的临床特点,该模型可做为人类ITP的动物免疫模型进行实验研究。2.与模型对照组比较,补气消癜汤和养阴消癜汤均能明显改善ITP模型小鼠的一般状况,增加小鼠体重(P<0.01),缩小肿大的脾脏,提高外周血血小板计数及骨髓产板巨核细胞总数,降低骨髓总巨核细胞数,差异显著(P<0.05,P<0.01)。3.通过ABC-ELISA法检测,证实补气消癜汤和养阴消癜汤能明显降低ITP模型小鼠血清细胞因子IL-2、IL-6、TGF-β1、TNF-α因子含量(P<0.01,P<0.05),提高小鼠体内IL-10的浓度(P<0.01),降低凋亡调控基因bcl-2蛋白的含量(P<0.05),降低外周血血小板生成素(TPO)浓度(P<0.01)。结论:本次研究结果表明,补气消癜汤及养阴消癜汤具有显著的升高血小板的作用。其作用可通过:⑴抑制体内Th1类细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α的分泌,提高Th2类细胞因子IL-10的浓度,调整机体Th1、Th2细胞功能失衡,抑制T细胞介导的免疫应答,并通过抑制B淋巴细胞的增殖、活化,减少血小板抗体的产生。⑵降低体内凋亡抑制基因bcl-2蛋白的含量,促进活化的淋巴细胞凋亡,调节免疫失衡。⑶降低血清TGF-β1含量,减轻对骨髓产板巨核细胞的抑制,促进其进一步分化、成熟;⑷通过刺激巨核系祖细胞的增殖、分化、成熟,促进TPO与巨核细胞及血小板膜上的TPO受体结合,从而降低外周血TPO浓度。以上研究表明补气消癜汤、养阴消癜汤通过多种途径作用于ITP模型小鼠,具有良好的升血小板作用,为临床应用提供了可靠依据。
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