【摘 要】
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弓形虫(Toxoplasma gondii)是专性细胞内寄生原虫,能引起人兽共患弓形虫病。本实验以弓形虫RH株的基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码去除了信号肽的MIC3基因片段,将其插入原核
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弓形虫(Toxoplasma gondii)是专性细胞内寄生原虫,能引起人兽共患弓形虫病。本实验以弓形虫RH株的基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码去除了信号肽的MIC3基因片段,将其插入原核表达载体pGEX-4T-3上,转化到大肠杆菌(Eschericlia coli)中。含重组质粒的大肠杆菌经诱导表达与谷胱甘肽巯基转移酶融合的MIC3蛋白(rTgMIC3)。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化rTgMIC3,对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析鉴定。以纯化的rTgMIC3做抗原,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人工感染刚地弓形虫弱毒株ME49株虫体的Balb/C小鼠的抗体,并追踪单只小鼠IgG抗体的消长动态。结果显示：rTgMIC3分子量为61.2 kDa,与理论预测值一致；小鼠感染弓形虫ME49株后第七天开始可测出特异性IgG抗体,在第三周抗体达到最高峰,然后维持在较高水平；rTgMIC3能够被弓形虫的天然MIC3蛋白识别；通过间接免疫荧光抗体试验对弓形虫的MIC3进行定位,发现MIC3都集中在虫体的前端。以纯化的rTgMIC3和截短的弓形虫表面抗原2为抗原建立的ELISA对福州某屠宰场的猪和羊弓形虫感染情况进行了检测,发现两种抗原对猪和羊的检测结果一致。福州猪弓形虫的血清阳性率为0.6%,羊的弓形虫的血清阳性率为2.2%。此外,通过体外侵入实验观察比较了抗rTgMIC3的鼠血清处理和未处理的弓形虫侵入宿主细胞的异同,发现抗rTgMIC3不能有效阻止弓形虫侵入宿主细胞。本实验成功实现了MIC3基因在大肠杆菌中的高效表达及rTgMIC3的应用,这为弓形虫病快速免疫诊断方法的研究奠定基础,有助于弓形虫感染的有效防治,保护人民的健康,促进畜牧业生产。
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