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肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，死亡率极高。研究表明:肝细胞癌在缺氧条件下的增殖、浸润与缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）所调控的基因表达有关，HIF-1α是肝癌防治的靶点。 藜蒿(Artemisia seiengensi)为生长于鄱阳湖畔的一种草本植物，其鲜嫩茎杆和肉质茎均为人们所喜食。藜蒿中含有黄酮化合物，较多的研究表明:植物黄酮具有多种生物活性，如降血糖血脂、抗心律失常、抗HIV病毒、抗自由基、抗氧化、抗抑郁、抗肿瘤等等。近年来，植物黄酮的抗肿瘤机制成为研究的热点。因此，有必要研究藜蒿黄酮是否具有抗肝癌作用及可能的机制。 本研究分为两个部分:其一，研究藜蒿黄酮的提取工艺;其二，在细胞水平研究藜蒿黄酮对肝癌细胞的作用及其与HIF-1α表达的关系。 第一部分超声波辅助法提取藜蒿黄酮的研究 目的: 为了在本研究室现有条件下高效率提取藜蒿黄酮，对本研究采用的超声波破碎、乙醇浸提方法提取藜蒿黄酮的工艺进行探讨，找到最适宜的提取工艺条件，为第二部分的研究作准备。 方法: 首先建立以芦丁作为参照品测定黄酮浓度的工作曲线及回归方程，对藜蒿进行前期的处理，然后通过单因素实验获得乙醇浓度、料液比、超声波处理时间、乙醇浸提时间的最佳值，再通过正交实验得出各影响因素对藜蒿黄酮类化合物提取工艺的影响程度。最后，分析各组结果，确定最佳的提取工艺。 结果: 通过光谱扫描确定测定芦丁对照品波长为486.60nm。芦丁对照品制得的标准曲线的回归为:C=0.10267*Abs+0.00276，R2=0.9998。 通过四个单因素实验得到乙醇浓度、料液比、超声波处理时间、乙醇浸提时间的最佳值分别为60％、1∶30、45min、6h。 根据正交实验得到的最佳提取工艺为乙醇浓度60％、料液比1∶40、超声波处理时间55min、乙醇浸提时间6h。 结论: 最佳的提取工艺条件为乙醇浓度60％、料液比1∶40、超声波处理时间55min、乙醇浸提时间6h，且最大的影响因素是料液比。 第二部分藜蒿黄酮对肝癌细胞SMMC7721的作用及与HIF-1α表达的关系 目的: 在离体细胞水平研究藜蒿黄酮是否具有抗肝癌作用，同时研究其与HIF-1α表达的关系，试图在细胞及基因水平研究藜蒿黄酮抗肝癌作用。 方法: 1、实验分组:阴性对照组、藜蒿黄酮作用组（分五个浓度梯度）、阳性对照组（阳性药物为:槲皮素），各组靶细胞为SMMC7721。 2、采用CCK8法测定藜蒿黄酮对SMMC7721抑制率及IC50。 3、采用细胞形态观察及流式细胞术研究藜蒿黄酮诱导SMMC7721凋亡作用。 4、采用RT-PCR及免疫组化研究藜蒿黄酮对SMMC7721细胞HIF-1α转录及翻译水平的影响。 结果: 1、CCK8法结果显示藜蒿黄酮可抑制SMMC7721生长，24h后IC50为345μg/ml，其抑制作用呈明显的浓度依赖和时间依赖。 2、细胞形态及流式细胞检测细胞凋亡结果均显示藜蒿黄酮可诱导SMMC7721凋亡。 3、藜蒿黄酮在转录及翻译水平抑制SMMC7721细胞HIF-1α的表达。 结论: 藜蒿黄酮可诱导SMMC7721细胞凋亡，该作用与HIF-1α表达低调相关。