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细胞治疗已经走过十多年的历程,起初科学家对免疫细胞进行大量研究,如细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗癌症具有可观的前景;而目前科学界对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cell, hUC-MSC)的研究较为关注,由于hUC-MSC比胚胎干细胞(ESC)、骨髓间充质干细胞(BM-MSC)等具有更好的临床应用潜能,从而成为人类再生医学和组织工程的研究热点。本研究目的是探索更有效的hUC-MSC分离培养方法和进一步研究hUC-MSC生物学特性,通过建立优化的实验方法,能为再生医学科研和临床应用提供操作规范标准和参考依据。方法:实验随机选取足月顺产健康胎儿脐带,采取手工机械分离法和3种酶组合消化法从脐带胶质中释放人脐带间充质细胞;并用优化完全培养基纯化培养;MTT法检测各代脐带间充质细胞生长增殖活性并绘制生长曲线;流式细胞术检测脐其生长周期和表面标志物;RT-PCR扩增基因P53、C-myc和OCT-4;结果:培养脐带间充质细胞形态为梭形、呈纤维样,并出现流水状或漩涡样生长;生长增殖速度较快,第7代脐带间充质细胞指数倍增时间小于30h;80%以上细胞处于G0/G1期;培养脐带间充质细胞均一稳定高表达CD29、CD70、CD105、CD90和CD44,而几乎不表达CD45、CD34和HLA-DR;P53基因在各代脐带间充质细胞均有表达,C-myc基因在第4代和第18代出现明显表达,OCT-4基因在不同代数均出现表达;结论:1)1h可分离30cm脐带胶质,获得的大量脐带间充质细胞(9×10~4/cm),经培养检测证明具有hUC-MSC的形态特征、增殖活性,表面抗原一致,是原始的hUC-MSC;2)通过RT-PCR检测各代脐带间充质细胞的P53、C-myc和OCT-4基因,发现培养10代以内hUC-MSC状态较正常。本研究意义:提示在临床应用hUC-MSC时,对其癌基因和抑癌基因全面检测以及衰老凋亡系统检测很有必要;本实验可为短期培养扩增出临床治疗所需要安全可靠的MSC提供研究基础,可为避免hUC-MSC体内移植治疗产生致瘤性提供参考依据。