SD大鼠骨髓间充质干细胞源性微囊泡对软骨细胞增殖活性及表型的影响

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tian_mizhen
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研究目的:  (1)全骨髓贴壁法分离、培养SD大鼠的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs),并鉴定所提取的BMSCs的分化潜能及表面特征性分子;  (2)探索提取及鉴定SD大鼠骨髓间充质干细胞源性微囊泡(bone marrow mesenchymal stem cells-derived microvesicles, BMSCs-MVs)的方法;  (3)将SD大鼠BMSCs-MVs和SD大鼠膝关节软骨细胞体外共培养,探究BMSCs-MVs对SD大鼠软骨细胞增殖状态及表型的影响;  研究方法:  (1)分离、培养SD大鼠BMSCs,用诱导干细胞分化及流式细胞技术(Flow Cytometry, FCM)分析细胞表面标志分子的方法对SD大鼠BMSCs进行鉴定;  (2)用超速离心法从 SD大鼠 BMSCs培养上清液中提取微囊泡(microvesicles,MVs)并用电镜鉴定其形态;  (3)分离、培养2月龄SD大鼠膝关节软骨细胞;  (4)所提取MVs与第3代软骨细胞进行共培养,用EdU、CCK-8试剂盒检测软骨细胞的增值活性,RT-PCR方法检测软骨细胞的分子合成及代谢活动变化。  实验结果:  (1)通过诱导BMSCs多向分化及流式细胞分析细胞表面标志分子的方法鉴定所提取SD大鼠BMSCs,发现分离培养的BMSCs在体外可被诱导分化为软骨及脂肪细胞,流式细胞术分析显示所培养的SD大鼠BMSCs群体表达CD29、CD90分子其阳性率分别为98.7%、99.2%,而CD45、CD11b分子阳性率分别为3.0%、0.2%;  (2)用EdU、CCK-8试剂盒检测与BMSCs-MVs共培养软骨细胞的增值活性,结果显示与BMSCs-MVs共培养的软骨细胞相对于对照组增殖明显(P<0.01),且BMSCs-MVs剂量越高,促进增殖效应越强(P<0.01);  (3)RT-PCR检测发现,相对于对照组,实验组软骨细胞的蛋白聚糖Acan、Ⅱ型胶原的表达增强,而Ⅹ型胶原、MMP-3、IL-1β的表达下降。  研究结论:  (1)体外共培养时,SD大鼠BMSCs-MVs具有促进膝关节软骨细胞的增殖的作用;  (2)体外共培养时,SD大鼠BMSCs-MVs能够增强膝关节表面软骨细胞蛋白聚糖(Acan)、Ⅱ型胶原分子的表达,同时抑制Ⅹ型胶原、MMP-3及IL-1β的表达,表明BMSCs-MVs可能有利于软骨细胞正常表型的维持。
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