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目的:⑴观察完全性截瘫大鼠脊髓提取液对新生大鼠背根节神经元(DRGNs)轴突生长的影响;⑵观察联合应用Rho-ROCKII和GSK-3β抑制剂对大鼠背根节神经轴突再生和延长的影响。方法:⑴健康雌性SD成年大鼠15只,随机分为:手术瘫痪组(5只)、假手术对照组(5只)和正常组(5只)。WD法制成SD大鼠T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,造模7d后取T8-10节段脊髓制作脊髓提取液。⑵新生大鼠DRGNs体外培养:取新生SD大鼠(<5d),显微操作下取胸腰段背根节(20～25个/只),酶解消化、机械吹打、离心、重悬、纯化,进行元代培养观察与鉴定。⑶实验一分组:A组,DRGNs+PBS;B组,DRGNs+正常脊髓提取液;C组,DRGNs+假手术脊髓提取液;D组,DRGNs+完全性截瘫大鼠脊髓提取液。⑷实验二分组:A组,DRGNs+PBS;B组,DRGNs+完全性截瘫大鼠脊髓提取液;C组,DRGNs+完全性截瘫大鼠脊髓提取液+Y26732;D组,DRGNs+完全性截瘫大鼠脊髓提取液+TDZD-8 ; E组, DRGNs+完全性截瘫大鼠脊髓提取液+Y26732+TDZD-8。⑸观察指标:共同培养1、2d后相差显微镜下照相、固定后免疫荧光,观察神经轴突长度、TubulinβIII阳性表达以及轴突远端平均荧光密度,实验结果采用SPSS13.0统计软件做单因素方差分析。结果:⑴实验一各组共同培养1d平均神经轴突长度:A组为144±28um,B组为134±11um,C组为125±30um,D组为47±5um;共同培养2d后:A组为211±21um,B组为182±15um,组为156±13um,D组80±8um。共同培养1、2d后,D组和A、B、C组之间分别比较差别有显著性;C组和A、B组之间分别比较差别有统计学意义;A和B组之间比较差别无统计学意义。共同培养2d后,轴突远端平均荧光密度分别是:A组为200.4±4.0 AFU/um,B组为199.2±6.6 AFU/um,C组为194.6±7.0 AFU/um;D组为75.1±4.1 AFU/um。在A组和B组中,神经轴突干和生长锥的TubulinβIII阳性表达强,而C组中TubulinβIII阳性表达弱,D组比C组TubulinβIII阳性表达更弱,特别在轴突远端和生长锥。D组和A、B、C组之间分别比较差别有显著性; A、B、C组之间比较差别无统计学意义。⑵实验二各组共同培养2d后平均神经轴突长度:A组为402±33um,B组为125±18um,C组为404±14um,D组为398±41um,E组为405±12um。B与其他组之间两两比较均有显著统计学意义;C、D、E组之间比较无统计学意义。共同培养2d后,轴突远端平均荧光密度分别是:A组为208.2±5.6 AFU/Um,B组为67.1±4.2 AFU/um,C组为362.6±5.6 AFU/um,D组为365.6±39.3 AFU/um,E组为379.8±23.6 AFU/um。在A、C、D和E组中,神经轴突干和生长锥的TubulinβIII阳性表达强,而B组中TubulinβIII阳性表达弱,特别在轴突远端和生长锥。B组和其他组差别均有显著统计学意义,E组和A、C、D组差别有统计学意义。结论:⑴完全瘫痪脊髓提取液能明显抑制DRGNs轴突生长,导致生长锥塌陷;假手术脊髓提取也能轻度抑制轴突生长,但生长锥无明显塌陷;正常脊髓不影响轴突生长。⑵30uM Y27632能明显促进轴突生长,形成细长的生长锥。⑶1uM TDZD-8能促进轴突生长,形成多个轴突或轴突分支,粗大生长锥。⑷适当浓度的TDZD-8和Y27632联合应用可明显导致轴突延长,形成多个轴突或明显轴突分支,比单一应用抑制剂作用更明显。