【摘 要】
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目的:观察锌指蛋白A20在内毒素(lipopolysaccharide,LPS)刺激情况下,对人椎间盘髓核细胞炎症因子、核因子-kappB(NF-κB)以及细胞退变指标表达变化的影响。方法:获取2017年6月至2018年7月间于我院骨科腰椎间盘退变患者术中切除的椎间盘组织,提取原代髓核细胞并进行培养,选择P1、P2代髓核细胞进行实验。采用完全随机法将同来源同代培养的髓核细胞分为对照组、单纯过表达A
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目的:观察锌指蛋白A20在内毒素(lipopolysaccharide,LPS)刺激情况下,对人椎间盘髓核细胞炎症因子、核因子-kappB(NF-κB)以及细胞退变指标表达变化的影响。方法:获取2017年6月至2018年7月间于我院骨科腰椎间盘退变患者术中切除的椎间盘组织,提取原代髓核细胞并进行培养,选择P1、P2代髓核细胞进行实验。采用完全随机法将同来源同代培养的髓核细胞分为对照组、单纯过表达A20基因腺病毒感染组、单纯LPS(10μg/mL)刺激组及LPS(10μg/mL)刺激+过表达A20基因腺病毒感染组。采用Real-time PCR测定A20 mRNA表达水平,Western blot检测A20蛋白、TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65、磷酸化p-p65以及退变相关指标蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原(collagenⅡ)等的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测上清液TNF-α、IL-1β的表达。结果:与对照组相比,单纯过表达A20基因组A20 mRNA与蛋白表达增高(P<0.05),而TNF-α、IL-1β、p-p65、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达无明显变化;与对照组相比,单纯LPS刺激组IL-1β、TNF-α、p-p65蛋白表达明显升高(P<0.05),而蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达则明显降低(P<0.05);而与单纯LPS刺激组相比,LPS刺激+过表达A20基因组TNF-α、IL-1β和p-p65蛋白表达显著下降(P<0.05),同时蛋白聚糖与Ⅱ型胶原蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人椎间盘组织的退变与髓核细胞炎症反应的发生发展密切相关,锌指蛋白A20有效抑制了髓核细胞炎症因子的产生和活化,可能在髓核细胞退变调控机制中发挥重要作用。
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