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目的通过对非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic, NOD)小鼠和BALB/c小鼠的比较性研究,探讨CD49b+CD25+NK细胞在妊娠耐受中的作用及其向妊娠子宫的迁移和归巢规律。材料与方法NOD小鼠具有NK细胞缺陷的特征,主要用于免疫耐受方面的研究。BALB／c和C57BL／6小鼠为SPF级近交系小鼠,遗传背景明确,广泛的应用于免疫学等方面的研究。建立NOD×C57BL/6和BALB/c×C57BL/6两种同种异基因妊娠小鼠模型。对两种同种异基因妊娠的小鼠分别进行分组,实验组于孕2.5天腹腔注射兔抗小鼠唾液酸神经节苷脂(asialo ganglio-N-tetraosylceramide, ASGM1),或静脉注射磁珠亲和细胞分选术(magnetic-affinity cell sorting, MACS)纯化的CD49b+CD25+NK细胞或CD49b+CD25-NK细胞。对照组通过相同注射途径注射RPMI1640培养基。在孕12.5天处死小鼠并计算其胚胎吸收率。从NOD和BALB/c孕鼠胎盘(包括胎盘及其附着处的蜕膜组织)获得的、MACS纯化的CD49b+NK细胞用流式细胞仪检测子宫NK (uterine natural killer,uNK)细胞内细胞因子的表达情况。从NOD和BALB/c孕鼠胎盘(包括胎盘及其附着处的蜕膜组织)分离单个核细胞,用双色流式细胞术检测小鼠子宫CD45+、CD3+和CD49b+淋巴细胞内Foxp3的表达情况。通过MACS纯化CD49b+ NK细胞,并用双色流式细胞术检测CXCR4在未孕NOD和BALB/c小鼠脾脏以及孕12.5天小鼠胎盘CD49b+NK细胞表面的表达情况。在transwell系统中,从未交配过BALB/c或NOD小鼠脾脏获得的、MACS纯化的CD49b+细胞加入上室,下室加入CXCL12和不加CXCL12进行比较,观察在CXCL12调控下CXCR4+NK细胞的迁移规律.采用CFSE(5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester)标记的来源于未交配C57BL／6小鼠脾脏的CD49b+NK细胞,静脉注射给孕2.5天的BALB/c和NOD小鼠。孕12.5天处死孕鼠收集胎盘单个核细胞,并采用流式细胞术检测细胞荧光信号。结果腹腔注射抗ASGMl清除或减少体内NK细胞数量,BALB/c(P<0.01)和NOD小鼠(P<0.05)的胚胎吸收率均显著升高。此外,NOD小鼠输注来源于正常小鼠脾脏的CD49b+CD25+NK细胞可显著降低胚胎丢失率(P<0.05),而BALB/c小鼠胚胎吸收率的改变无统计学意义(P>0.05).BALB/c和NOD小鼠输注CD49b+CD25-NK细胞则未能减少胚胎丢失。与野生型BALB/c×C57BL/6小鼠相比,NOD×C57BL/6小鼠(P<0.01)的子宫IFN-γ+NK1细胞亚群构成比显著增高,TGF-β+NK3和IL-10+NKrl细胞亚群构成比则降低(P<0.01),而IL-4+NK2细胞亚群百分率与野生型相比无显著性差异(P>0.05)。在BALB/c小鼠,Foxp3+细胞在CD3+细胞(P<0.01)和CD49b+细胞亚群(P<0.05)中所占百分率均高于NOD小鼠。此外,子宫Foxp3+细胞在CD49b+细胞亚群中的百分率显著高于在CD3+细胞亚群中的百分率,在BALB／c(P<0.01)和NOD小鼠(P<0.05)中均观察到这种趋势。在子宫CD49b+CD25+NK细胞中,CXCR4+百分率显著高于CD49b+CD25-NK细胞(P<0.01)。但是未交配NOD雌鼠脾脏CD49b+CD25+NK细胞中CXCR4+百分率低于未交配BALB/c雌鼠(P<0.01)。此外,未交配BALB/c雌鼠脾脏CD49b+CD25+NK细胞中CXCR4+百分率显著高于脾脏CD49b+CD25-NK细胞中的这一百分率(P<0.01)。在未交配NOD雌鼠未观察到这种趋势。在NOD小鼠脾脏CD49b+CD25-NK和CD49b+CD25-NK细胞仅检出较低水平的CXCR4表达。在transwell系统中采用流式细胞术检测观察到,加入下室的CXCL12可优先吸引脾脏CXCR4+细胞迁移,而CXCR4"细胞则仍留在上室,不向下室迁移。在BALB/c和NOD小鼠均观察到这种现象。从下室收集的CD49b+NK细胞中,CXCR4阳性百分率高于上室的这一百分率(P<0.01)。BALB/c和NOD小鼠同一百分率相比,则没有显著性差异(P>0.05)。在CFSE标记的CD49b+NK细胞体内迁移实验中,在CFSE标记的CD49b+CD25 NK细胞过继输注组仅检测到极少量的CFSE信号,而在CD49b+CD25+NK细胞输注组能检测到更多的CFSE标记细胞(P<0.01)。结论孕期动员子宫外表达CXCR4+的CD49b+CD25+NK细胞向妊娠子宫内迁移,有助于维持妊娠成功。