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安徽砀山地区梨资源丰富,砀山酥梨在世界水果市场占据重要地位。由于梨种内变化大,加上种间的杂交,使砀山地区梨在长期的进化和栽培中形成了丰富的资源类型。对砀山地区梨种质资源进行研究,进行资源类型的鉴定,探讨品种间的亲源关系。以达到合理利用这些资源,对加快梨育种进程有重要意义。AFLP(扩增长度片段多态性)是一种新的DNA分子标记技术,具有高效、稳定、可靠的特点。通过对影响AFLP技术体系的各主要因素的研究,建立了适于砀山酥梨AFLP分析的技术体系:酶切体系25μL,总体积中含纯化后的DNA500ng;EcoRI和MseI各3U,分步进行酶切;酶切完成后加入连接液,16℃连接过夜(8~12h);连接产物稀释10倍用于预扩增;预扩增产物稀释10倍用于选择性扩增;扩增产物加入等体积的上样缓冲液,95℃变性5min后,在6%变性聚丙烯酰胺上恒功率(70W)进行电泳,然后进行银染显色。本研究利用确立的AFLP技术体系对砀山地区的27个梨资源类型进行了遗传多样性分析评价和芽变鉴定,运用3对选择性扩增引物组合进行扩增,每对引物产生的带纹都相当丰富,每个泳道有50条以上清晰的条带,扩增片段DNA的长度30bp-600bp。3对引物共扩增出清晰可靠的DNA谱带180条,平均每对引物扩增出60条。其中166条为多态性带,平均多态性比率为92.2%,多态性最高的为引物组合EcoRⅠ-3/MseⅠ-1,高达100%,最低的是EcoRⅠ-2/MseⅠ-3,多态性为89.7%。未发现任何两个个体的基因型完全相同的现象。亲缘关系较近的品种间,带型差异小;反之则大。聚类分析结果表明,当遗传距离阀值为39.2~40.1时,全部供试生物型可分为6类:第1类包括:砀山酥梨和其变异类型以及一些地方品种、杂交种;第2类包括:雪花梨、鸭梨、紫酥、慈梨、早美酥、丰水、新高,白梨和砂梨聚在了一类;第3类包括库尔勒香梨、红香酥;南果梨、红巴梨、豆梨各聚一类。砀山酥梨的8个变异类型,运用AFLP技术进行分析,与对照砀山酥梨相比,变化的条带为:锈酥9条,细皮酥15条,油皮酥6条,王酥5条,扁酥5条,棱酥8条,八怪酥7条,良梨早酥10条。