论文部分内容阅读
本文研究了洛伐他汀(LOV)、辛伐他汀(SIM)通过抑制法尼基化途径对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机理。
[方法]以MTT法检测LOV、SIM对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM生长增殖的影响；以细胞粘附人工重组基底膜实验检测LOV、SIM对HO-8910PM细胞粘附能力的影响；用Transwell小室法检测LOV、SIM对HO-8910PM细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响；流式细胞技术分析LOV、SIM对HO-8910PM细胞周期的影响；Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变；Westernblot法检测LOV、SIM对HO-8910PM细胞Ras、ERK2、I-κBα、NF-κB(p65)、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平的影响；逆转录PCR检测LOV、SIM对HO-8910PM细胞的K-Ras、NF-κB(p65)、HIF-1α、VEGF、RhoA等基因mRNA表达水平的影响；采用γ-32P掺入法检测MAPK活性，观察LOV、SIM对HO-8910PM细胞Ras-MAPK信号转导的作用。
[结果]
(1)不同浓度的LOV、SIM处理不同时间后，人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的生长增殖受到一定的抑制；细胞周期分析显示，各给药组内G1期细胞明显增多，G2、S期细胞减少，用药浓度高(SIM32μM/72h、SIM64μM/48h和LOV32μM/48h)时有指示细胞凋亡的亚G1期“凋亡峰”出现，荧光染色结果显示典型的凋亡小体，表现为核固缩、核破碎。以上作用均有浓度—效应和时间依赖关系。(2)LOV和SIM均能够明显地抑制HO-8910PM细胞的体外趋化运动、侵袭和粘附能力(P＜0.05)。(3)随LOV、SIM用药浓度的增高，细胞膜上Ras蛋白水平逐渐降低，胞浆中Ras蛋白水平逐渐增加，总Ras蛋白的表达变化不大。可见，LOV和SIM均能抑制活化的Ras蛋白锚定于细胞膜上，抑制了它的生物活性，从而影响其下游靶蛋白。(4)随用药浓度的增高，LOV、SIM能明显下调HO-8910PM细胞的ERK2、HIF-1α、VEGF蛋白表达；在胞浆中上调NF-κB(p65)、下调I-κBα蛋白表达水平，而在细胞核中恰恰相反。(5)随用药浓度的增高，LOV、SIM能使NF-κB(p65)、VEGF、RhoAmRNA表达水平逐渐下降，K-Ras、HIF-1αmRNA的表达没有明显的变化。(6)激酶活性检测结果显示，4μmol/L～64μmol/L的SIM处理48h～72h，均能明显抑制MAPK活性(P＜0.01)。
[结论]LOV、SIM能抑制人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭、运动和粘附能力。LOV、SIM抗肿瘤转移的作用机制与它们抑制某些蛋白(如Ras蛋白)的法尼基化反应有关。LOV和SIM均能抑制Ras蛋白的法尼基化即抑制它锚定于细胞膜上，抑制了其生物活性，从而影响Ras-MAPK信号转导作用和其下游靶蛋白HIF-1α、VEGF、I-κBα、NF-κB(p65)等。他汀类药物具有抗肿瘤生长和转移的潜能，有开发成为临床抗肿瘤辅助用药的潜力和价值。