【摘 要】
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研究背景强直性脊柱炎（AS）是一种慢性炎性自身免疫性疾病,其特征主要包括全身性炎症和病理性成骨,AS的持续发展和进展最终会导致脊柱融合和韧带骨化而致残。长链非编码RNA（lncRNA）是一类由基因组中的非编码序列转录生成的长度≥200 bp,稳定性较差的且不参与蛋白质编码的转录本。lncRNAs可以调节许多免疫细胞的生长发育,如树突状细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞等。随着二代测序技术的兴起,越来越多
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研究背景强直性脊柱炎（AS）是一种慢性炎性自身免疫性疾病,其特征主要包括全身性炎症和病理性成骨,AS的持续发展和进展最终会导致脊柱融合和韧带骨化而致残。长链非编码RNA（lncRNA）是一类由基因组中的非编码序列转录生成的长度≥200 bp,稳定性较差的且不参与蛋白质编码的转录本。lncRNAs可以调节许多免疫细胞的生长发育,如树突状细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞等。随着二代测序技术的兴起,越来越多的lncRNAs被发现具有重要的生物学功能,lncRNAs可以在细胞质中通过与转录因子的结合进而调节机体免疫细胞的发育和分化,也可以通过参与组蛋白修饰或与核内不均一性核糖核蛋白结合调节炎症基因的转录,但lncRNAs调控免疫性疾病发生的具体方式和机制还有待研究。研究目的lncRNAs在调节免疫功能方面起到重要的作用,然而lncRNAs在AS中的作用机制尚不完全清楚,对AS患者中差异表达的lncRNAs进行分析和比较,为临床诊断AS和其靶向治疗提供潜在的分子标志物。研究方法选取的17例AS疾病活动组病人（ASDAS-CRP≥1.3分）、17例AS疾病非活动组病人（ASDAS-CRP<1.3分）以及17例健康对照组,首先分别取各5例行高通量lncRNA测序,从测序结果中筛选出差异显著的5个lncRNAs,对差异表达的lncRNAs进行基因本体论分析和京都基因和基因组百科全书富集分析,并在各组其他的12例样本中,运用实时荧光定量PCR技术对差异性表达的候选lncRNAs进行验证,并运用受试者工作特征曲线检测以寻找特异性高、灵敏度高的潜在生物标志物。研究结果高通量测序显示,AS活动组与AS非活动组相比全血中具有差异性表达的lncRNA共706个,其中378个表达上调,328个表达下调;AS活动组与健康对照组相比具有差异性表达的lncRNA共958个,其中517个表达上调,441个表达下调;AS非活动组与健康对照组相比具有差异性表达的lncRNA共680个,349个表达上调,331个表达下调。富集分析显示lncRNAs主要与炎症相关途径有关,如抗原加工和呈递、TRP的炎症介质调节、细胞粘附分子（CAM）、AMPK信号通路、Wnt信号通路、cAMP信号通路等。随后的RT-qPCR验证结果表明,与非活动性AS和健康对照组相比,活动性AS患者中的lnc-CKMT2-AS1表达和lnc-LEF1-AS1表达均升高;用Pearson相关系数分析发现lnc-CKMT2-AS1和lnc-LEF1-AS1的表达与ASDAS-CRP水平成正相关;运用ROC曲线进行分析,结果提示lnc-CKMT2-AS1和lnc-LEF1-AS1为AS的患病风险提供了良好的预测价值。研究结论在强直性脊柱炎患者全血中有多条lncRNAs差异性表达,表明它们在强直性脊柱炎发病过程中可能发挥着重要作用;lnc-CKMT2-AS1和lnc-LEF1-AS1表达与ASDAS-CRP水平成正相关,提示两者对AS的风险及疾病活动性可能有预测价值。
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