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目的探讨雾化吸入灭活草分枝杆菌对哮喘小鼠T-bet/GATA-3表达的影响,了解草分枝杆菌的免疫调节作用。方法将24只雄性Balb/c小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、治疗组(C组),每组8只。哮喘组和治疗组于第0天、第7天和第14天用25μgOVA和1mg氢氧化铝混合于PBS中的0.2ml混悬液腹腔注射小鼠,第21至27天用2%OVA·PBS雾化激发小鼠,每天30min,治疗组在第28天至第32天雾化吸入1支灭活草分枝杆菌稀释于10ml的生理盐水中,每日1次。对照组则用生理盐水代替腹腔注射和雾化激发,哮喘组用生理盐水代替灭活草分枝杆菌雾化治疗,雾化过程中观察小鼠的行为及活动情况等变化。最后一次雾化12h内测小鼠气道反应性,24h内将小鼠处死,支气管肺泡灌洗液(BALF),左肺组织病理切片行HE染色和PAS染色观察小鼠肺内炎症改变,参照文献方法行病理半定量评分,明确各组小鼠气道炎症严重程度;肺组织病理切片行免疫组化观察T-bet和GATA-3的表达量;ELISA法检测BALF中IFN-γ和IL-4表达水平;实时荧光定量PCR检测肺组织中T-bet、GATA-3、STAT1、STAT6mRNA水平;流式细胞术检测肺组织单个核Th1、Th2细胞占CD4~+T细胞百分比。结果哮喘组小鼠在雾化激发过程中出现典型的哮喘表现症状。哮喘组在12.5mg/ml、25mg/ml以及50mg/ml浓度Mch激发后sRaw明显高于对照组(p<0.05),同时也高于治疗组(p<0.05),治疗组在25mg/ml以及50mg/ml浓度Mch激发后sRaw明显高于对照组(p<0.05)。肺组织HE染色发现,治疗组与哮喘组对比,支气管周围炎症细胞浸润减少,PAS染色发现治疗组管腔中杯状细胞较哮喘组明显减少;免疫组化发现哮喘组中的T-bet明显低于对照组,GATA-3明显高于对照组,治疗组中的T-bet明显高于哮喘组,GATA-3明显低于哮喘组,差异均具有统计学意义(p<0.05);哮喘组中IFN-γ、肺及脾组织中T-bet、STAT1 mRNA表达水平和Th1细胞百分比与对照组相比明显降低(p<0.05),IL-4、GATA-3及STAT6 mRNA表达水平和Th2细胞百分比较对照组明显升高(p<0.05);治疗组IFN-γ、肺组织中T-bet、STAT1mRNA表达水平和Th1细胞百分比较哮喘组明显升高(p<0.05),IL-4、GATA-3及STAT6 mRNA表达水平和Th2细胞百分比较哮喘组明显降低(p<0.05)。相关性分析发现,小鼠肺组织中T-bet mRNA与Th1细胞百分比呈明显正相关(r=0.70,p<0.01),GATA-3 mRNA与Th2细胞百分比呈明显正相关(r=0.76,p<0.01)。结论T-bet在哮喘中表达水平降低,GATA-3在哮喘中的表达升高,提示T-bet/GATA-3参与哮喘小鼠的发病过程,哮喘小鼠Th1/Th2失衡可能与转录因子T-bet/GATA-3失衡有关。雾化吸入灭活草分枝杆菌可以减轻哮喘小鼠气道炎症,通过调节转录因子水平,增加T-bet mRNA而降低GATA-3mRNA表达,进而抑制Th2细胞因子分泌。目的探讨灭活草分枝杆菌对哮喘小鼠γδT细胞的影响,了解草分枝杆菌的免疫调节作用。方法将24只雄性Balb/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、治疗组,每组8只。哮喘组和治疗组于第0天、第7天和第14天用25μg OVA和1mg氢氧化铝混合于PBS中的0.2ml混悬液腹腔注射小鼠,第21至27天用2%OVA·PBS雾化激发小鼠,每天30min,治疗组在第28天至第32天雾化吸入1支灭活草分枝杆菌稀释于10ml的生理盐水中,每日1次。对照组则用生理盐水代替腹腔注射和雾化激发,哮喘组用生理盐水代替灭活草分枝杆菌雾化治疗,雾化过程中观察小鼠的行为及活动情况等变化。24h内将各组小鼠处死,取肺及脾组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),左肺组织病理切片行HE染色和过碘酸-雪夫染色(PAS染色)观察小鼠肺内炎性细胞浸润情况及杯状细胞增生情况,明确各组小鼠气道炎症严重程度;ELISA法检测BALF中IFN-γ和IL-4表达水平;流式细胞术检测肺组织单个核细胞IFN-γ、IL-4细胞占γδT细胞百分比。免疫磁珠法分选纯化哮喘组小鼠脾γδT细胞,分为空白对照组(A组)、OVA组(B组)和草分枝杆菌干预组(C组),48小时后收集细胞,流式细胞术检测γδT细胞的IFN-γ及IL-4表达情况。结果哮喘组小鼠在雾化激发过程中出现典型的哮喘表现症状。肺组织HE染色发现,与哮喘组相比,治疗组支气管周围炎症细胞浸润减少,PAS染色发现治疗组管腔中杯状细胞较哮喘组明显减少。ELISA结果显示,哮喘组BALF中的IFN-γ表达降低,IL-4表达升高,与对照组相比,其差异均有统计学意义(p<0.05);治疗组BALF中的IFN-γ表达水平明显升高,IL-4明显降低,与哮喘组相比,其差异均有统计学意义(p<0.05)。流式细胞术检测发现,哮喘组肺组织中的γδT细胞表达IFN-γ明显降低,IL-4明显升高,与对照组对比,差异有统计学意义(p<0.05);治疗组肺组织中的γδT细胞表达IFN-γ明显升高,IL-4明显降低,与哮喘组对比,差异有统计学意义(p<0.05)。体外实验显示,B组γδT细胞表达IL-4增多,IFN-γ降低,与A组相比,差异具有统计学意义(p<0.05);C组γδT细胞表达IL-4减少,IFN-γ增多,与B组对比,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论致敏小鼠γδT细胞表达IL-4增多,IFN-γ减少,表明γδT细胞同样存在γδT1/γδT2失衡,并呈γδT2优势表达。灭活草分枝杆菌可通过γδT细胞促进IFN-γ表达,抑制IL-4表达,调节γδT1/γδT2失衡。