【摘 要】
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本论文在小麦TaSAP5分离克隆的基础上,完成了其在干旱胁迫下的功能鉴定及调控途径解析。我们发现TaSAP5超表达显著提高小麦和拟南芥的抗旱性,其编码蛋白具有泛素E3连接酶功能
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本论文在小麦TaSAP5分离克隆的基础上,完成了其在干旱胁迫下的功能鉴定及调控途径解析。我们发现TaSAP5超表达显著提高小麦和拟南芥的抗旱性,其编码蛋白具有泛素E3连接酶功能,并能介导DREB2A互作蛋白DRIP (DREB2A INTERACTING PROTEIN)的降解,进而增加DREB2A蛋白的积累。取得的主要研究结果如下:1.来自A、B、D染色体组的TaSAP5部分同源基因都受干旱胁迫的诱导表达,超表达TaSAP5转化拟南芥和小麦能够显著提高其抗旱性,且不影响正常生长条件下的生长。2.通过RNA-seq分析和RT-PCR分析发现,超表达TaSAP5小麦和拟南芥转基因株系在干旱胁迫后与WT相比,DREB2A下游基因显著上调表达,而DREB2A自身的转录表达并无显著差异。通过Western blot发现干旱胁迫后DREB2A蛋白在超表达TaSAP5转基因株系中显著高于对照,说明TaSAP5可能通过蛋白质水平促进DREB2A蛋白的表达;3.在小麦原生质体中进行亚细胞定位实验发现TaSAP5定位在细胞核与细胞质,通过体外泛素化实验验证了 TaSAP5具有E3泛素连接酶功能;4.通过烟草瞬时表达体系进行体内Co-IP,发现TaSAP5与DREB2A蛋白的负向调控因子DRIP互作并介导其体内泛素化;在拟南芥和小麦TaSAP5超表达转基因株系中,TaSAP5超表达显著加剧DRIP的泛素化降解,并且这种降解部分通过26S蛋白酶体途径完成;5.综合以上研究结果,我们发现小麦中参与抗旱的E3泛素连接酶TaSAP5能通过泛素化降解DRIP进而增加DREB2A蛋白的积累及其下游基因表达,为小麦抗旱机制研究与育种应用提供了有价值的信息。
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