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目的:研究观察多克隆睫状神经营养因子(ciliaryneurotrophicfactor,CNTF)抗体对肉毒毒素(botulinumtoxin,BTX)注射眼外肌和面肌后引起的神经末梢萌芽的抑制作用,及对肌肉的影响。
对象和方法:15只新西兰大白兔,体重2-2.5Kg,雌雄不限。用50mg/Kg氯氨酮和5mg/Kg地西泮肌肉注射联合麻醉,注射BTXA及取标本前均予麻醉。全麻下,随机取5只兔双上直肌及颧部面肌作为空白对照,不予任何处理(1组);其余10只,在无菌操作环境中,直视下于双上直肌中后2/3处,及双侧颧部面肌皮下各注射A型肉毒毒素(botulinumtoxinA,BTXA)2.5U。在注射后第4天,将50μlCNTF抗体一次性注射到右眼上直肌,右侧颧部面肌从第4天开始每日注射5ulCNTF抗体共10天,抗体均按照1:2浓度用生理盐水(normalsaline,NS)稀释;左侧上直肌及面肌相应部位注射等量生理盐水作为对照。注射BTXA后14天,全麻下取出双眼上直肌及颧部面肌。左侧为注射BTXA+NS(2组),右侧为注射BTXA+CNTF抗体(3组)。标本行乙酰胆碱酯酶染色和Bielschowsky神经末梢银染法,于光学显微镜下显示运动终板形态和神经末稍萌芽;以及行电镜观察运动终板、神经髓鞘和肌细胞的超微结构变化。
结果:使用Leica显微镜成像系统计数及测量:眼外肌、面肌有萌芽终板数占总终板数的百分比(%);萌芽平均总长度/有萌芽的终板数(μm)两个指标。1组(正常对照)眼外肌分别为5.75±1.39%和10.53±1.51μm;面肌为5.63±1.05%和15.36±3.51μm。2组(注射BTXA+NS)眼外肌为84.04±3.56%和170.71±46.83μm;面肌为86.03±6.88%和161.24±60.83μm。3组(注射BTXA+CNTF抗体)眼外肌为54.77±8.05%和68.12±17.27μm;面肌为61.49±9.34%和96.76±30.18μm,1、2、3组两两比较差异均有统计学意义。在3组中,眼外肌一次性注射CNTF抗体,面肌每日注射该抗体,总量相等,两者有萌芽终板数占总终板数的百分比(%)及萌芽平均总长度/有萌芽的终板数(μm)两个指标的结果行t检验,差异无统计学意义。此外,电镜超微结构显示:与1组相比较,2组肌纤维明显萎缩,而肌原纤维和神经结构无明显改变;而注射BTXA+CNTF抗体3组,除了肌纤维萎缩外,还可见部分肌丝断裂溶解,变性的肌细胞坏死崩解成细胞碎片,引起部分肌肉不可逆性破坏,而神经髓鞘及运动终板结构无明显改变。
结论:多克隆CNTF抗体可以抑制BTX诱发的神经萌芽的长度及数量,引起局部肌肉不可逆性破坏,从而可能延长肌麻痹恢复的时间,提示多克隆CNTF抗体可能延长BTX的肌麻痹作用。但是否可以延长BTX的作用时间还需远期的观察及电生理功能上的进一步验证及研究。