小孢拟盘多毛孢PM-1菌株代谢产物中除草活性物质的分离及研究

• 作 者: 王珺瑫
• 机 构: 河北农业大学
• 出 处: 河北农业大学
• 发表日期: 2013年01期
• 关键词: 小孢拟盘多毛孢 高速逆流色谱 高效液相色谱 分离 除草活性

本实验室前期从发病毛竹叶片上分离纯化得到的一株真菌，经形态学和分子生物学鉴定，明确其为小孢拟盘多毛孢Pestalotiopsis microspora，并定名为PM-1菌株。文献报道，该属的真菌代谢产物多具有很强的药理活性和抑菌、除草作用，该菌株经生物测定对多种田间常见的杂草有较强的抑制作用，具有作为生物除草剂的开发潜力。本试验对小孢拟盘多毛孢粗提物的分离纯化方法进行研究，以期得到具有除杂草活性的毒素组分，为进一步鉴定其化学结构，研究其性质和功能提供依据，也为杂草的生物防治奠定基础。本试验取得的主要结果如下：1.对小孢拟盘多毛孢PM-1菌株进行了液体培养，发酵液用等体积乙酸乙酯萃取，旋转蒸发得到粗提物；利用高速逆流色谱(high speed countercurrent chromatography，HSCCC)对小孢拟盘多毛孢PM-1菌株的粗提物进行了初步的分离纯化研究。参考Oka设计的方法，配制10种溶剂体系，利用茎叶处理法对马唐生长的抑制率进行计算并得到分配系数，从而选择最佳粗提物的HSCCC溶剂体系。结果表明，第7号溶剂体系较适合作为粗提物的HSCCC分离条件，即正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=4:5:4:5，在此分离条件下粗提物可以初步分离为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个馏分，其中馏分Ⅱ有较强除草活性。馏分Ⅱ经高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）以乙腈:水=75:25（V/V）为流动相经过C18柱进一步分离得到保留时间为7.95min的馏分A，经二极管阵列光谱检测为单一组分，生物测定结果表明，馏分A对马唐种子萌发表现了较强的抑制活性。2.利用硅胶柱层析法对小孢拟盘多毛孢PM-1粗提物进行分离纯化得到3个具有除草活性的馏分，即馏分3、4和8。利用HPLC检测分离后的馏分，结果表明，经硅胶柱层析和高效液相色谱得到的馏分B对马唐种子萌发有较强的抑制作用，其保留时间为3.510min，对该峰经二极管阵列光谱检测确定其为单一组分。