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目的：本研究系统回顾了近几年来中医药治疗糖尿病肾病的临床研究进展及糖尿病肾病发病机制的研究进展,分别以单侧肾切除加链脲佐菌素注射造成糖尿病肾病模型和构建大鼠Uqcrfs1重组质粒,观察中药柴黄益肾颗粒对糖尿病大鼠肾组织的保护作用并探讨其对糖尿病肾病大鼠肾脏的作用机制,以及观察大鼠Uqcrfs1重组质粒在HEK293T细胞中的表达,为寻找糖尿病肾病新的有效临床标志物,探索药物的作用靶点提供线索。方法：1.中药柴黄益肾颗粒对STZ诱导糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠的保护作用及机制探讨：采用单侧肾切除加STZ腹腔注射方法,建立1型DN大鼠模型,随机分为模型组、柴黄益肾组和蒙诺组,另设假手术组为正常组,每组12只。分别于第0、4、8、12、16、20周动态观察大鼠一般状态、体重、血糖、24h尿蛋白。第20周时动物取材,血生化仪检测大鼠血脂水平以及肾功能的变化；半定量评价实验动物肾组织肾小球及肾小管间质病理变化；采用RT-PCR方法检测实验大鼠肾组织TGF-β1、NF-κB的mRNA水平表达；采用Western Blot方法检测实验大鼠肾组织TGF-β1、IkappaB α、p-IkappaB α蛋白表达水平。2.大鼠Uqcrfs1重组质粒的构建及其在HEK293T细胞中的表达：分别在上、下游引物设计含有EcoR Ⅴ和Xho Ⅰ酶切位点的引物,应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码Uqcrfs1的cDNA,对PCR产物进行回收纯化,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定及测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,分别应用RT-PCR、Western Blot方法检测重组质粒Uqcrfs1/pcDNA3.1/V5-His在转录及蛋白水平的表达。结果：1.中药柴黄益肾颗粒对STZ诱导DN大鼠的保护作用及机制探讨：自造模成功后第0周起,模型组大鼠血糖、24h尿蛋白、肾功能等指标较正常组显著升高；造模后第20周的病理学结果表明模型组大鼠肾组织出现肾小球系膜基质中至重度增生、基底膜增厚、球囊粘连甚至弥漫性肾小球硬化等肾小球改变,同时表现有肾小管扩张、萎缩、蛋白管型、炎性细胞浸润及间质纤维化等肾小管间质改变；柴黄益肾颗粒以及蒙诺片剂可显著减轻上述病理改变,显示出良好肾脏保护作用；但是,柴黄益肾组、蒙诺组实验大鼠的血糖及肾功能水平未见显著改善,甚至蒙诺组实验大鼠的血糖、BUN水平出现升高趋势；与模型组比较,柴黄益肾组大鼠血糖水平有降低趋势,但无统计学差异；给药后,柴黄益肾组以及蒙诺组实验大鼠的血脂水平见明显降低,TC与TG水平较模型组均有显著差异；模型组大鼠肾组织TGF-β1mRNA及蛋白表达水平显著高于正常组,而柴黄益肾组及蒙诺组均能显著降低其表达,并且具有统计学意义；模型组大鼠肾组织NF-κB mRNA表达水平较正常组显著升高,而其在柴黄益肾组及蒙诺组的表达均显著降,结果具有统计学意义：模型组大鼠肾组织IkappaB α、p-IkappaB α蛋白表达水平显著高于正常组,柴黄益肾组及蒙诺组均能显著降低其表达,并且具有统计学意义。2.大鼠Uqcrfs1重组质粒的构建及其在HEK293T细胞中的表达：相关特异引物及PCR反应系统能够扩增出大鼠肾脏的cDNA的Uqcrfs1目的基因片段,克隆至pUM-T载体后,目的基因片段与pcDNA3.1/V5-His经EcoR Ⅴ、Xho Ⅰ双酶切后,由T4DNA ligase成功连接,转化入DH5α感受态细胞后,筛选阳性菌落,经PCR鉴定、酶切鉴定及最终测序结果证实PCR扩增得到编码Uqcrfs1的cDNA序列正确；磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,分别采用RT-PCR及Western Blot方法检测目的基因Uqcrfs1在基因转录与蛋白水平的外源性表达,结果达到预期。结论：1.中药柴黄益肾颗粒可以降低STZ诱导DN大鼠的血脂及24h尿蛋白水平,其作用机制可能与改善脂代谢有关,而与血糖无相关性；纤维化是肾脏局部病理改变的关键,柴黄益肾颗粒具有一定的抗肾组织纤维化作用,其机制可能与抑制TGF-β1的表达,影响NF-κB与IkappaBa的平衡有关。2.本研究成功构建了大鼠Uqcrfs1/pcDNA3.1/V5-His重组质粒,该重组质粒可在HEK293T中过表达。上述工作为探讨Uqcrfs1基因在糖尿病及其并发症发病机制的分子生物学作用及药物靶向治疗提供了实验基础。