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目的： 建立一种新生KM小鼠小胶质细胞原代培养的可行方法，并对所得小胶质细胞的纯度进行鉴定。 方法： 选用出生24小时以内的KM小鼠。用纯物理方法提取大脑皮层原代细胞后进行混合胶质细胞培养，并辅以营养剥离法。原代混合胶质细胞培养10-14天，待观察到细胞充分分层生长后，以普通浓度胰酶和低浓度胰酶消化分别分离纯化小胶质细胞。通过细胞计数计算产量，细胞密度计算公式:（4个大格的细胞个数之和/4）×104个/毫升细胞悬液。利用Iba1免疫细胞化学染色的方法对其纯度进行鉴定，阳性细胞即为小胶质细胞。在随机选取的7个高倍镜视野下计数阳性细胞数和细胞核总数，并计算阳性细胞率，即小胶质细胞纯度(％)=阳性染色细胞数/细胞核总数×100％。 结果： 原代神经胶质细胞混合培养24小时后可以观察到，有少量细胞贴壁，形态大多未完全展开。随后细胞数目逐日增多，并出现聚堆生长，处于底层的星形胶质细胞形态开始逐渐铺开。混合培养5-7天时开始明显分层生长，混合培养10-14天时，成堆分层生长的细胞连成片，小胶质细胞数目越来越多，且大多处于静息状态。分离培养后第7天，小胶质细胞的突起变长，多级突起细胞数目增加，此时大部分细胞转为静息状态。通过单独使用营养剥离法纯化培养小胶质细胞的产量为7.3×105个/瓶(25cm2)，通过营养剥离法加低浓度胰酶消化法纯化培养的小胶质细胞产量为1.0×106个/瓶(25cm2)。用PBS溶液代替一抗作对照染色，结果为阴性。Iba1为小胶质细胞的标记物，经过Iba1免疫细胞化学染色，单独使用营养剥离法纯化培养所得阳性细胞数为56.29±3.30个/视野，细胞核总数为79.14±5.05个/视野，小胶质细胞纯度为71.17±2.30％;营养剥离法加低浓度胰酶消化法所得阳性细胞数为73.14±9.23个/视野，细胞核总数为76.29±10.03个/视野，小胶质细胞纯度为95.95±1.26％。与单用营养剥离法相比，营养剥离法加低浓度胰酶消化法所得阳性细胞数和小胶质细胞纯度，差异有统计学意义(P＜0.05);所得细胞核总数差异无统计学意义(P＞0.05)。用营养剥离法加低浓度胰酶消化法进行分离纯化，成功获得了纯度＞95％的小胶质细胞。 结论： 1.本研究采用纯物理方法提取原代细胞，用营养剥离法加低浓度胰酶消化法分离纯化所得到的小胶质细胞产量为1.0×106个/瓶(25cm2)，纯度为95.95±1.26％。 2.用营养剥离法加低浓度胰酶消化法分离纯化所得小胶质细胞产量及纯度满足进一步实验要求，优于单用营养剥离法，且易于操作，适合长期培养。 3.本研究采用纯物理方法提取原代细胞，营养剥离法加低浓度胰酶消化法进行分离纯化，成功建立了一种新生KM小鼠小胶质细胞原代培养的可行方法。