耐碱性木聚糖酶基因的克隆、表达及高产工程菌的构建

来源 :中国科学院微生物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luishifei
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从碱性土壤中分离筛选到一株耐碱性木聚糖酶高产菌株,通过形态学及16S rDNA 分析初步鉴定为短小式孢杆菌(Bacillus pumilus).BP51 在 pH8.0 及30-37℃培养时具有良好的产木聚糖酶能力.麸皮可以有效地诱导木聚糖酶的产生,同时受葡萄糖的强烈抑制.液体培养 72 hr 达到最大产酶量,产酶量最高可达553.4IU/mL 培养物.BP51 产生的木聚糖酶不具有纤维素酶活性,最适温度为55℃,最适pH为6.5,在pH9.0的条件下仍能保持60﹪的酶活力.在50℃和碱性条件下具有良好的稳定性,水解产物以三糖、四糖、五糖为主.以常规 PCR 方法及 TAIL-PCR 方法分别从耐碱性木聚糖酶高产菌株BP51的染色体DNA中克隆得到木聚糖酶基因 xynA 及其上游调控区,并分析了可能的调控位点.通过木糖诱导使重组菌株中的 xynA 基因高效分泌表达,重组木聚糖酶活力可达968.0 IU/mL,比原菌株BP51 所产木聚糖酶的活力提高了 87﹪,同时对BPX11 中重组木聚糖酶的性质进行了初步研究,结果表明其性质与原始菌株BP51产生的木聚糖酶性质一致.
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