家蚕化学感觉蛋白BmorCSP9在幼虫和蛹期的表达分析

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昆虫化学感受蛋白(CSps)是一类小分子质量的水溶性蛋白,广泛分布于昆虫的多种化学感受器中,具有多种生理功能。本研究以鳞翅目家蚕(Bombyx mori)为试验材料,利用Quantitative real-time RT-PCR(qRT-PCR)、Western杂交和免疫荧光定位方法分析家蚕Bmorcsp9基因和BmorCSP9蛋白在幼虫期、蛹期以及幼虫不同组织的表达特征,为进一步阐明昆虫CSPs的功能和作用机制提供有益的信息。最后尝试通过喂食或注射dsRNA的方式干扰家蚕Bmorcsp9基因的表达,对Bmorcsp9基因dsRNA干扰的条件进行初步探索。研究结果表明:  一、家蚕Bmorcsp9基因在幼虫和蛹期的表达特征  利用qRT-PCR的方法分析了家蚕Bmorcsp9基因在家蚕幼虫不同虫龄、蛹期以及5龄幼虫不同组织部位的表达特征。结果显示,在幼虫的不同虫龄和蛹期,Bmorcsp9基因具有明显的规律性表达特征。在1~5龄幼虫眠蚕的表达量较低,起蚕升高,取食12h后又下降,至5龄末吐丝前表达量又急剧上升;化蛹后2d再次下降,蛹末期羽化前又有所上升。5龄幼虫中,Bmorcsp9基因在头部、胸部、腹部和尾部的表达水平较高,以头部和胸部表达量最高。在内部组织丝腺和精巢中没有表达,卵巢中仅有少量表达。  二、家蚕BmorCSP9蛋白在幼虫不同虫龄的表达分布  利用Western杂交和免疫荧光定位方法分析BmorCSP9蛋白在幼虫不同虫龄的表达分布。Western杂交结果显示,家蚕BmorCSP9蛋白在整个幼虫期,包括每个虫龄的起蚕、取食中、眠蚕时都有表达。免疫荧光定位结果显示,BmorCSP9蛋白在家蚕幼虫的体表包括头部、胸部、腹部、足以及体表的体毛上都有分布。这与qRT-PCR的结果特征基本一致。由此推测,该蛋白可能在家蚕不同时期发育过程中发挥重要调控作用。  三、家蚕Bmorcsp9基因RNA干扰条件的初步探索  利用T7RNA聚合酶以带有T7启动子的家蚕Bmorcsp9的cDNA的PCR产物为模板,通过体外转录制备dsRNA,然后通过直接喂食或注射的方式,试图干扰Bmorcsp9基因在家蚕中的表达。利用qRT-PCR检测RNA干扰效果,结果发现,仅个别处理组Bmorcsp9的表达低于对照组,但Bmorcsp9没有被完全干涉掉。RNA干扰的条件需要进一步优化。
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