猪-猴异种异体角膜移植的初步实验研究

• 作 者: 孙存
• 机 构: 首都医科大学
• 出 处: 首都医科大学
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 角膜移植 糖皮质激素 排斥反应 细胞免疫 体液免疫 组织病理学

目的:探讨猪-猴穿透性角膜移植排斥反应的特点及糖皮质激素干预治疗对异种异体角膜移植排斥反应的作用，为将来临床应用猪角膜进行移植奠定基础。
材料方法: 6只3月龄五指山小型猪(WZS)为供体，12只恒河猴为受体，建立异种异体穿透性角膜移植动物模型。受体猴分为两组：角膜移植组和激素干预组。激素干预组的受体猴在穿透性角膜移植术毕结膜下注射长效倍他米松(得宝松<○R>)0.5 ml(7mg/ml)，此后每间隔10天结膜下注射得宝松<○R>0.3ml，共10次，角膜移植组受体猴同时间注射等量生理盐水。术后定期裂隙灯下观察角膜植片的存活情况。术前及术后不同时间取受体猴外周血及房水，采用流式蛋白分析系统检测猴血浆中细胞因子，流式细胞仪检测外周血淋巴细胞分类，免疫浊度法检测猴外周血免疫球蛋白IgG，IgA，IgM和补体C3，C4的变化。流式蛋白分析系统检测受体猴手术前后房水中细胞因子的变化。术后1个月取角膜植片行病理组织学和免疫组织化学染色检查。
结果:成功建立猪.猴异种异体角膜移植动物模型。角膜植片平均存活时间角膜移植组为(15.5±2.3)天；激素干预组为(182.8±66.1)天，差异有统计学意义(P<0.001)。角膜移植组植片术后1周内无明显浸润，术后第8天在前房形成渗出膜，术后第12～13天，角膜植片明显水肿，浸润，前房渗出膜加重，植床周边新生血管形成。随后角膜植片水肿、浸润加重，新生血管长入，出现植片排斥发应。而激素干预组在给药期间植片维持透明，仅有轻微的植片水肿反应，在3个月观察期内未出现排斥反应。在停用糖皮质激素1～6个月后，角膜植片开始发生排斥反应。组织病理学检查发现，角膜移植组植片与植床相比明显增厚，基质层大量炎性细胞浸润，角膜内皮面破坏，前房内形成渗出膜，与角膜内皮面相连。在激素干预组，角膜植片内少量淋巴细胞浸润，内皮完整，无渗出膜。免疫组织化学染色两组角膜植片均未见CD4<+>，CD8<+>T淋巴细胞表达。两组猴全身体液免疫和细胞免疫学检查发现，术后第2～3周角膜移植组免疫球蛋白IgG、IgA、IgM，补体C3、C4浓度升高，而激素干预组外周血中IgG浓度不升高，补体C4浓度降低，可能提示受体IgG和补体C4与异种异体角膜移植免疫排斥反应的发生有关。
结论:猪-猴异种异体角膜移植不发生超急性排斥反应而是急性排斥反应，主要表现为角膜内皮排斥反应，细胞免疫和体液免疫可能都参与了排斥反应的发生，局部应用糖皮质激素能明显延长角膜植片存活时间。