论文部分内容阅读
目的:观察GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心脏功能的调节作用和其对PI3K/Akt/Caspase-9信号转导通路的影响,探讨GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心肌细胞的保护作用机制。方法:清洁级SD大鼠140只,2~3月龄,体重(188.17±21.86)g,分为4组:正常对照组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)和GHRP-6治疗组(D组)。C组和D组通过结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心力衰竭模型,B组开胸后左冠状动脉前降支穿线,不结扎。造模4w后,D组按100μg?kg-1?d-1剂量尾静脉注射GHRP-6,其余组尾静脉注射等量生理盐水,连续注射4w。应用心电图、B型超声检测各组大鼠心脏功能;HE染色法观测各组大鼠心肌病理变化;免疫组织化学SABC法检测各组大鼠左心室后壁和室间隔心肌细胞PI3K p110α、Akt p-Ser308、Akt p-Thr473、Caspase-9和Caspase-3蛋白的表达情况;流式细胞术检测各组大鼠左心室和室间隔心肌细胞凋亡率。结果:1.各组大鼠心功能的检测结果:(1)术后8w单通道标准肢体导联Ⅱ心电图显示:A组、B组大鼠心电图律整,各波形正常;C组、D组ST段明显回落,呈下斜状,T波倒置,部分动物可见病理性Q波;D组ST段回落幅度接近于正常水平,倒置的T波电压<0.1mV,而C组倒置的T波电压>0.1mV。(2)术后8w M模式超声可见C组和D组大鼠左心室前壁运动减弱,C组左室前壁运动波形几乎消失,左心室扩大明显,与A组、B组比较LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV均明显增加(P<0.05),LVEF%明显降低(P<0.05);D组与C组比较LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV均有显著的改善(P<0.05),LVEF%明显升高(P<0.05)。2.HE检测结果:A组和B组心肌细胞排列规律,横纹和闰盘清晰可见。C组心室前壁梗死区心肌细胞消失,炎性细胞浸润,胶原纤维增生;左室后壁和室间隔细胞排列紊乱,心肌细胞肥大,细胞分支多,横纹及闰盘消失,胶原纤维大量增生。D组心室前壁梗死区可见残存的心肌细胞,细胞核少见,肌浆红染,结构不清;可见炎性细胞浸润,胶原纤维增生;左室后壁和室间隔心肌细胞排列尚规律,肥大亦不明显,部分细胞仍可见横纹及闰盘,间质有少量胶原纤维增生。3.SABC法检测结果:PI3K p110α蛋白阳性表达量,C组较A组、B组显著降低(P<0.05),D组较C组显著升高(P<0.05)。Akt p-Thr308蛋白阳性表达量,C组较A组、B组显著降低(P<0.05),D组较C组显著升高(P<0.05)。Akt p-Ser473蛋白阳性表达量,C组较A组、B组显著降低(P<0.05),D组较C组显著升高(P<0.05)。Caspase-9蛋白阳性表达量,C组较A组、B组阳性表达量显著增加(P<0.05),D组较C组显著降低(P<0.05)。Caspase-3蛋白阳性表达量,C组较A组、B组显著增加(P<0.05),D组较C组显著降低(P<0.05)。4.FCM检测结果:C组(14.81%±1.86%),与A组(5.30%±1.13%)、B组(5.67%±0.99%)比较,凋亡率显著升高(P<0.05);D组(10.49%±1.38%)与C组比较,凋亡率明显降低(P<0.05)。结论:GHRP-6通过调控PI3K/Akt/Caspase-9/Caspase-3信号转导通路,抑制心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡,是其实现心肌细胞保护作用机制之一。