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目的:本课题研究Wnt信号通路对大鼠脑室出血后柔脑膜纤维化的影响。实验通过检测大鼠脑室出血后脑脊液中纤维化标志物PICP的表达变化,脑组织中Wnt信号通路(β-catenin,Wnt3a)的激活情况,探讨Wnt信号通路在大鼠脑室出血后柔脑膜纤维化中的作用,为临床上脑室出血后柔脑膜纤维化和慢性脑积水的治疗提供新的思路及方法。方法:1.运用脑立体定位仪,将大鼠自体尾静脉血注入大鼠侧脑室来建立大鼠脑室出血的动物模型。2.清洁级雄性SD大鼠75只,体重180g~200g之间,随机分为三个组,脑室出血组(IVH组)(n=25),假手术组(n=25),正常对照组(n=25)。各组按断头处死的时间不同分别分为3d、6d、10d、14d、21d共5个亚组。IVH组采用二次注射法缓慢推注20μL抗凝自体尾静脉血至模型大鼠的侧脑室;假手术组只穿刺至侧脑室,不注射自体血液;正常对照组不作处理,正常饲养。3.在动物模型建立后第21d采用MASSON染色对柔脑膜纤维化的程度进行测量比较。在不同时间点采用放射免疫法检测各时间点大鼠脑脊液中PICP含量,采用免疫组化法检测各时间点大鼠大脑半球脑组织Wnt信号通路(β-catenin,Wnt3a)的激活情况,收集标本后进行数据的统计学分析。结果:1.MASSON染色显示IVH组大鼠的柔脑膜灰度值显著低于假手术组、正常对照组(P<0.01),厚度显著高于假手术组、正常对照组(P<0.01),柔脑膜的胶原纤维含量显著高于假手术组、正常对照组(P<0.01);假手术组、正常对照组之间各指标无显著性差异(P>0.05)。2.PICP浓度变化:假手术组、正常对照组的大鼠脑脊液中PICP浓度在各时间点无明显变化(P>0.05);假手术组、正常对照组大鼠脑脊液中PICP浓度之间无显著性组间差异(P>0.05)。IVH组大鼠脑脊液中PICP浓度水平显著高于假手术组和正常对照组(P<0.01)。3.Wnt3a蛋白测定:正常对照组、假手术组的大鼠脑组织中Wnt3a蛋白在各时间点无明显变化(P>0.05);正常对照组、假手术组大鼠脑组织中Wnt3a蛋白之间无显著性组间差异(P>0.05)。IVH组大鼠脑组织中Wnt3a蛋白表达水平显著高于假手术组和正常对照组(P<0.01)。4.β-catenin蛋白测定:正常对照组、假手术组的大鼠脑组织中β-catenin蛋白在各时间点无明显变化(P>0.05);正常对照组、假手术组大鼠脑组织中β-catenin蛋白之间无显著性组间差异(P>0.05)。IVH组大鼠脑组织中β-catenin蛋白表达水平显著高于假手术组和正常对照组(P<0.01)。5.IVH组大鼠的脑脊液中PICP的浓度和脑组织中Wnt3a表达变化呈正相关(R2=0.942,P<0.01)。脑脊液中PICP的浓度和脑组织中β-catenin表达变化呈正相关(R2=0.958,P<0.01)。脑组织中Wnt3a和β-catenin表达呈正相关(R2=0.905,P<0.01)。结论:1.应用脑立体定位仪,采用二次注血法,制作大鼠IVH模型,方法简单,操作性强,与人体IVH的病理生理变化特点相近,是较理想的IVH动物模型。2.IVH后的第2l天,柔脑膜发生明显的胶原增生,纤维化形成。柔脑膜的MASSON染色可作为柔脑膜纤维化的检测指标。3.IVH后,大鼠脑脊液中PICP浓度会显著升高,提示柔脑膜发生纤维化。柔脑膜纤维化的发生和累积可能是导致IVH后慢性脑积水形成的原因。脑脊液中PICP的浓度持续高表达与纤维化的严重程度相关。4.IVH后,脑组织中β-catenin和Wnt3a蛋白表达均增强,且与大鼠脑脊液中PICP浓度升高呈正相关,提示Wnt信号通路(β-catenin和Wnt3a)的激活在IVH后柔脑膜纤维化的发生发展及形成中可能发挥着重要作用。