论文部分内容阅读
目的:调查结核患者中结核分枝杆菌的耐药性,分析耐药结核分枝杆菌临床分离株的rpoB、gyrA和gyrB基因的突变情况,探讨一线药物利福平、二线药物氧氟沙星的耐药产生与rpoB基因、gyrA和gyrB基因突变的关系,为结核分枝杆菌(MTB)的耐药性研究、耐多药结核病(MDR-TB)和广泛耐药结核病(XDR-TB)的诊断与治疗提供新的实验依据。方法:①收集湖南省胸科医院6535例就诊的肺结核患者的标本,进行结核分枝杆菌液体培养及绝对浓度法药物敏感性实验(简称“药敏实验”,DST),检测培养菌株对链霉素(SM,S)、异烟肼(INH,H)、利福平(RFP,R)、乙胺丁醇(EMB,E)、卡那霉素(KM,K)和氧氟沙星(OFX,O)6种药物的敏感性,以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv为对照,获得菌株对6种药物的耐药谱。②选取利福平耐药菌株,用超声波裂解法提取MTB基因组DNA,对与利福平耐药相关的rpoB基因进行扩增、测序并比对其突变情况,分析基因突变和耐药表型的关系。③选取氧氟沙星耐药菌株,采用超声波裂解法提取MTB基因组DNA,对与氧氟沙星耐药相关的gyrA和gyr B基因进行扩增、测序,分析该两个基因突变与耐药表型的相关性。结果:①结核分枝杆菌培养阳性1140例,初治患者826例,复治患者314例;耐药肺结核患者443例,其中耐药初治患者296例,耐药复治患者147例,总耐药率为38.85%(443/1140),初治患者总耐药率为35.84%(296/826),复治患者总耐药率为46.81%(147/314)。耐多药患者270例,耐多药率为23.68%(270/1140),其中同时耐利福平、异烟肼和链霉素在耐多药模式中所占比例最高,达32.22%(87/270)。而单一耐药以利福平最高,耐单药率为28.51%(325/1140)。②本地区rpoB基因突变以C531T(Ser→Leu)为主,占69.64%(39/56),其中耐多药菌株有29株(70.73%),其次是发生在RRDR-526位点上的基因突变,占16.07%。③1140株阳性标本中有140株对氧氟沙星耐药,单耐药率高达12.28%,是二线药物中耐药率最高的一种药物,而在32株氧氟沙星耐药的MTB中,所测的gyr基因突变共有25株,且均为gyrA基因突变,其突变率为78.1%(25/32)。gyrA基因突变株中,以94位点较为常见,占gyrA基因突变的60.0%(15/25),而在gyrB基因上均未发现突变位点。结论:①某院就诊的结核患者的结核分枝杆菌总耐药率和耐多药率分别为38.85%和23.68%。②rpoB基因的81bp耐药区域上以RRDR-531和RRDR-526两个位点上的突变为主要突变形式。③氧氟沙星耐药与gyr基因突变有一定的关系,gyrA基因突变是主要突变形式。