【摘 要】
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为研制安全有效并能常温保存的粘膜免疫AIV疫苗,本研究采用枯草芽孢杆菌(B.S.)识别的启动子和信号肽构建了表达载体pBC38C,并将GFP基因克隆到pBC38C中,筛选阳性重组质粒,转化
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为研制安全有效并能常温保存的粘膜免疫AIV疫苗,本研究采用枯草芽孢杆菌(B.S.)识别的启动子和信号肽构建了表达载体pBC38C,并将GFP基因克隆到pBC38C中,筛选阳性重组质粒,转化入B.S.,阳性菌的菌体和菌落均有明显荧光,证实了表达载体能实现外源基因在B.S.中表达。在选择压力条件下,质粒遗传稳定率为96 %左右,无选择压力下,稳定性下降,为56 %左右。以lacZ为报告基因,测定表达载体的活性,β-半乳糖苷酶活性最高为26 mU/mL。对小鼠进行大剂量、长时间饲喂,结果证实菌株对动物安全,能非特异性地提高小鼠细胞免疫水平。将AIV H5N1 HA基因克隆到pBC38C中,构建HA基因重组B.S.,以CTB为基因佐剂,Western blot、IFA等检测表明,HA基因在B.S.中得到表达。小鼠免疫试验结果表明,所构建的重组菌能刺激小鼠产生较高水平的抗AIV HA特异性细胞免疫和粘膜免疫以及低水平的体液免疫,CTB作为粘膜免疫佐剂,能提高粘膜免疫水平。
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