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鸡生长与免疫抑制综合征(暂定名,缩写为SIS)是近年来危害养鸡业的重要传染性疾病之一,不仅本身能引起养殖业的严重损失,而且免疫抑制可使鸡对其他病原的易感性增高,导致多重混合感染或继发感染,给预防和治疗带来很大困难。目前已对该病的病原进行了分离,并初步证明为一种新的病毒引起的疾病,但还缺乏对该病的检测和防治方法,本课题基于此,以期能在该病毒的检测和疫苗研制方面提供试验依据,为进一步防治该病奠定试验基础。1.利用自制的兔抗鸡生长与免疫抑制综合征病毒免疫血清,在试验室条件下建立起了斑点酶联免疫吸附试验法(Dot-ELISA)、斑点免疫金染色法(Dot-IGS)和间接酶联免疫吸附试验法(间接ELISA)三种免疫检测方法。Dot-ELISA法的最佳反应条件为:包被抗原的最佳稀释度1:200,酶标二抗的最佳稀释度1:1000,底物最佳反应时间10min,抗原包被后检测样品总时间只需3h。Dot-IGS的最佳反应条件为:病毒的最佳稀释度1:200,酶标二抗的最佳稀释度1:1000,抗原包被后检测样品总时间需3h。间接ELISA的最佳反应条件为:包被抗原的最佳稀释度为1:100,酶标二抗的最佳稀释度为1:1000,底物最佳反应时间为30min,抗原包被后检测样品总时间需5h。经特异性、重复性试验和三种方法的比较,结果表明Dot-ELISA和间接ELISA均具有较好的特异性和可重复性,且Dot-ELISA具有操作简便、灵敏度高、检测时间短、使用的仪器简单、检测费用低等优点。2.制备了鸡生长与免疫抑制综合征病毒灭活油乳剂疫苗。含病毒尿囊液经甲醛灭活后,加入4%灭菌Tween-80,摇匀,即成制苗水相,待用。将轻质药用白油、司本80和硬脂酸铝按照94mL:6mL:2g的比例配制,为制苗油相(混合物),高压灭菌,备用。油相在8000～10000r/min搅拌的同时,按1:1的比例缓慢加入水相,乳化3min,在终止搅拌前加入终浓度为0.01%的硫柳汞溶液,即成为乳白色的油乳剂苗。乳化后,取10mL以3,000r/min离心10min,若有分层现象,应重复搅拌一次。将乳化好的疫苗分装加盖密封,贴标签,4～8℃保存。制备的疫苗外观为乳白色油状物,均匀一致。冷水表面测试油乳剂灭活苗滴于冷水表面,呈圆形油滴状,不扩散,为油包水型。稳定性试验表明制备好的油乳剂灭活苗经3,000r/min离心30min未见分层,稳定性好。粘度测定表明用1mL标准吸管,在室温下垂直放出0.4ml疫苗的时间为8s,适合注射用。无菌检验表明该疫苗于普通营养琼脂平板培养基中,37℃培养48h无杂菌生长。存放试验表明制备的油乳剂灭活苗疫苗置37℃左右保存21日,未出现分层破乳现象;该疫苗4～10℃保存至今(9个月)仍为均匀一致的乳白色油状物,未出现分层现象,通过ELLSA试验检测抗原的效价基本未降低。急性毒性试验表明所制备的灭活苗接种1日龄雏鸡24天后未发现鸡群有异常表现,所制备疫苗是安全的。研制的鸡生长与免疫抑制综合症病毒灭活油乳剂疫苗的最适剂量为0.3mL/羽,免疫途径为颈部皮下注射,免疫日龄为1～2日龄。免疫后7天开始产生抗体,免疫后21天达到攻毒完全保护,攻毒100%保护的抗体临界值为1:128。免疫后第21天至14周,抗体水平均保持在攻毒100%保护临界值之上,具有完全保护的能力,该灭活苗的保护期为3个月。