论文部分内容阅读
镰形棘豆（Oxytropis falcate Bunge）在藏药中被称为“莪达夏”，是多种藏药复方和蒙药复方中的主要组成药味。课题组前期对其进行了系统的化学成分研究，本论文开展了镰形棘豆药材及其复方制剂消痛贴和青鹏软膏的质量标准研究，为镰形棘豆药物的开发以及其复方制剂的安全应用提供了参考依据。此外，采用课题组提出的中药复方制剂质量控制新策略，本论文建立了经典名方六味地黄丸的多指标全药材整体色谱，用以全面反映复方药中全部中药材的存在和质量以及指标成分的含量信息。主要内容如下: (1)通过对镰形棘豆的化学成分及其药理活性和质量控制的指标成分等方面的文献调研和初步的实验分析，确定了2，4-二羟基查尔酮为镰形棘豆的质控指标成分，在此基础上，对2，4-二羟基查尔酮进行了提取、分离、结构表征、纯度测定及稳定性考察，最终获得了量大(＞10 g)、纯度高(＞99.0％)、结构明确、稳定性好的化学纯品，为镰形棘豆药材及其复方制剂的质量控制的确立提供了化学对照品。 (2)以2，4-二羟基查尔酮作为镰形棘豆药材及其复方药消痛贴膏的指标成分，采用高效液相色谱法(HPLC)，建立了镰形棘豆药材及其复方药消痛贴膏的单指标质量控制方法，并测定了30批不同产地的镰形棘豆药材和10批消痛贴膏复方制剂中2，4-二羟基查尔酮的含量。所建立的方法简单、灵敏、重复性好，可为镰形棘豆药材及其复方药消痛贴膏质量标准的制定提供依据。 (3)研究建立了高效、灵敏、可靠的超高效液相色谱-二极管阵列检测-电喷雾质谱联用(UPLC-PDA-ES I-MS)的分析方法，完成了21批镰形棘豆药材的全分析，建立了镰形棘豆药材的UPLC-PDA色谱指纹图谱，确定了30个共有峰，对获得的指纹图谱进行相似性分析(SA)、聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA)等化学计量学统计分析，结果显示不同采集地的镰形棘豆样品具有相似的化学成分。通过与对照品的保留时间、紫外特征吸收光谱图和质谱数据比对，确定了其中11个共有峰的化学结构。建立的镰形棘豆色谱指纹图谱能够客观反映镰形棘豆药材的指纹特征，可对镰形棘豆药材的质量进行全面深入的控制与评价。 (4)青鹏软膏是以镰形棘豆为主药制成的经典藏成药，然而铁棒锤是另外一味组成药。铁棒锤中含有二萜双酯型生物碱类毒性成分。为评价青鹏软膏皮肤用药的安全性，本研究首先采用新兴的超高效液相合相色谱-电喷雾质谱联用(UPCLESI-MS)技术，建立了铁棒锤中5种二萜双酯型生物碱（3-乙酰乌头碱、次乌头碱、脱氧乌头碱、新乌头碱和乌头碱）的定量分析方法。此外，将建立的方法与已报道的方法进行了比较，结果表明，建立的UPC2-ESI-MS方法分析速度快、灵敏度高，可为铁棒锤的质量评价提供参考。 (5)在对铁棒锤中的二萜双酯型生物碱定量分析的基础上，建立了青鹏软膏中二萜双酯型生物碱的UPLC-PDA-ESI-MS/MS多反应监测(MRM)的定量分析方法，并将其应用到10批次青鹏软膏的测定，从而明确了毒性成分在青鹏软膏中的含量水平。青鹏软膏是一种皮肤外用制剂，为了进一步评价青鹏软膏皮肤用药的安全性，本研究还通过体外体内透皮吸收试验评价了青鹏软膏中乌头碱的皮肤透过性和经皮吸收入血情况，结果表明乌头碱的经皮渗透性差，且不能透过皮肤进入血液，证实了青鹏软膏皮肤用药的安全性。 (6)本研究采用课题组先期提出的复方药质量评价新策略，建立了经典名方六味地黄丸的多指标全药材整体色谱分析方法。首先，从组成六味地黄丸的每一味中药材中选取1-2个活性成分作为指标成分，共8个指标成分，即尿囊素、莫诺苷、马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷、丹皮酚、23-乙酰泽泻醇、茯苓酸。随后，采用超声细胞粉碎提取法(UCGE)从六味地黄丸中同时提取指标成分，并通过响应曲面法对提取条件进行了优化，得到了最优的提取条件:料液比1∶45 gmL-1、提取时间40 min和提取温度20℃。与传统的溶剂提取方法相比，超声细胞提取法更为有效、快速，且操作更为简便。然后，采用UPLC-PDA方法在一次运行中获得所有指标成分的量化信息。多指标全药材整体色谱分析方法反映了六味地黄丸中全部中药材的存在和质量以及指标成分的含量信息，为六味地黄丸的质量控制提供了一种创新模式和创新理念。