论文部分内容阅读
目的： 探讨G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor，GPER)介导的谷氨酰胺代谢活性改变对ER+乳腺癌他莫昔芬（tamoxifen，TAM）耐药细胞株MCF-7R耐药性的影响及机制。 方法： 使用qRT-PCR、Western Blot方法检测ER+人乳腺癌细胞MCF-7及其他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中谷氨酰胺酶（glutaminase，GLS1）表达情况。分别加入TAM、GPER特异性抑制剂G36+TAM、GPER特异性激动剂G1处理MCF-7R，Western Blot方法检测PI3K/Akt信号通路活化情况、GLS1表达量；向GPER活化的MCF-7R细胞中加入PI3k/AKT通路抑制剂LY294002，Western Blot检测GLS1表达量变化情况。用shGPER慢病毒转染MCF-7R细胞，建立靶向干扰GPER表达的乳腺癌TAM耐受细胞株MCF-7R/shGPER模型，qRT-PCR、Western Blot检测干扰GPER基因后GLS1及p-Akt的表达情况；使用谷氨酰胺、?-酮戊二酸试剂盒与线粒体绿色荧光探针分别检测MCF-7R/shCtrl、MCF-7R/shGPER细胞在GPER调节剂处理下的谷氨酰胺代谢及线粒体活性情况。加入TAM、BPTES+TAM处理MCF-7R细胞，CCK-8法检测细胞凋亡并计算IC50。 结果： 1.qRT-PCR、Western Blot验证TAM、G1诱导活化GPER，激活PI3K/Akt信号通路，调控下游GLS1表达；G36、LY294002及靶向干扰GPER（shGPER）可抑制由TAM、G1诱导的GLS1基因表达。 2.经TAM处理后，MCF-7R对谷氨酰胺摄取量及?-酮戊二酸生成量增加、线粒体活性增强；经BPTES+TAM处理后，MCF-7R对谷氨酰胺摄取量及?-酮戊二酸生成量减少、线粒体活性减弱，凋亡增加耐药细胞对TAM敏感性恢复。 结论： ER+乳腺癌TAM耐药细胞MCF-7R中TAM作为GPER的激动剂，活化信号通路PI3K/Akt促进GLS1表达，增强谷氨酰胺代谢及线粒体活性，促进乳腺癌细胞对TAM耐受；抑制GPER表达或抑制PI3K/Akt通路可下调GLS1表达，减弱谷氨酰胺代谢及线粒体活性，促使MCF-7R恢复对TAM的敏感性。GPER介导的谷氨酰胺代谢模式的改变在药物耐受中发挥重要作用。