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[目的]研究牙龈卟啉单胞菌内毒素(LPS from Porphyromonas gingivalis, P.g-LPS)对体外培养的人牙髓细胞(humen dental pulp cells, HDPCs)合成分泌IL-6, IL-1β、TNF-a的影响,研究云南白药对P.g-LPS诱导人牙髓细胞分泌IL-6、IL-1β、TNF-a的影响,探索LPS在牙髓炎发生发展中的作用及云南白药对牙髓炎抑制的影响,为牙髓炎症机制研究及拓展云南白药在口腔疾病中的应用提供实验依据。[方法]采用改良组织块法体外培养人牙髓细胞,免疫组化技术鉴定细胞来源,在培养细胞内加入不同浓度(100μl/ml、10μl/ml、1μl/ml、0.1μl/ml、0.01μl/ml)的P.g-LPS, MTT法检测不同浓度的P.-LPS对人牙髓细胞增殖的影响,在分别培养1d、3d、6d后,ELISA检测培养上清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,培养第6天定量Real-Time PCR检测细胞TNF-α、 IL-6、IL-1β的表达。根据实验结果选择浓度为10μg/ml的P.g-LPS刺激人牙髓细胞24h,终止LPS刺激后,对照组加入1%FBS的a-MEM培养液,LPS组加入10μg/ml P.g-LPS+1%FBS的a-MEM培养液,白药组加入10μg/ml云南白药+1%FBS的α-MEM培养液。继续培养,于第1d,3d ELISA检测培养上清中IL-6、TL-1β、 TNF-α水平,培养第3天定Real-Time PCR检钡TNF-α、IL-6、IL-1的表达。[结果l通过改良组织块法分离培养的HDPCs波形丝蛋白表达阳性,角蛋白为阴性,属于中胚层来源。MTT实验结果显示与对照组比较P.g-LPS浓度为100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml时抑制细胞的增殖(P<0.05),其抑制作用随浓度升高加强；浓度为0.1μg/ml、0.0lμg/ml时可促进HDPCs的增殖(P<0.05)。ELISA检测及RT-PCR结果显示,与对照组比较高浓度(100μg/ml、10μg/ml) P.g-LPS作用HDPCs Id时,细胞培养上清中TNF-a水平即可明显升高(P<0.01),作用3d和6d的时,两实验组TNF-a仍处较高水平(P<0.01),并且100μg/ml组中TNF-α水平均较前一时间点有所升高(P<0.05)；实验组中100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml组作用HDPCs后IL-6水平均升高(P<0.01),并随时间延长抑制作用增强,IL-6水平含量逐渐升高(P<0.05),实验组100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml组作用HDPCs1d和3d后IL-1β水平上升(P<0.01),第3d时IL-1β水平高于第1d(P<0.05),第6d时IL-1β水平有所下降(P<0.05)。P.g-LPS作用HDPCs后均表达TNF-α、IL-6和IL-1β。100μg/ml和10μg/m P.g-LPS组炎性因子表达量较高(P<0.05),且P.g-LPS浓度越高相对表达量越明显(P<0.05)。10μg/mlPg-LPS刺激HDPCs后,细胞培养上清中均可检测到TNF-α、IL-6、IL-1β。终止P.g-LPS作用后,对照组和白药组TNF-α、IL-6、IL-1β的水平较LPS组下降(P<0.05)。但白药组中TNF-α、IL-6、IL-1β的水平与对照组比较并未下降(P>0.05)。RT-PCR结果显示,在终止P.gLPS作用后,对照组和白药组’TNF-α、IL-6、IL-1β的表达均较LPS持续作用组减少。10μg/ml的云南白药作用后,炎性因子]TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达较对照组下降(P<0.05)。[结论](1)P.g-LPS对HDPCs的增殖影响与其浓度有密切关系。高浓度(100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml)抑制细胞增殖,低浓度(0.1μg/ml、0.01μg/ml)则促进细胞增殖；(2)浓度为100μg/ml和10μg/ml的P.g-LPS可刺激HDPCs分泌炎性因子]TNF-α、 IL-6、IL-β,随着P.gLPS浓度增加TNF-α、IL-6、IL-β水平相应较高。且100μg/ml和10μg/ml的P.g-LPS可使TNF-α、IL-6、IL-β mRNA表达上调。(3)本实验条件下云南白药在终止P.g-LPS作用后3d内对TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌未表现抑制,但其下调了TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达。