【摘 要】
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单链抗体(single chain Fv)是用人工合成的15-20个氨基酸的短肽(Linker)将抗体重链可变区VH与轻链可变区VL基因连接起来而形成单一多肽链的重组蛋白,是具有完整抗原结合特异
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单链抗体(single chain Fv)是用人工合成的15-20个氨基酸的短肽(Linker)将抗体重链可变区VH与轻链可变区VL基因连接起来而形成单一多肽链的重组蛋白,是具有完整抗原结合特异性的最小结构功能单位。其相对分子量为25KD左右,大小仅为完整抗体的六分之一。因其分子量比较小,制备简单,穿透力强,免疫原性低的特点而广泛应用于肿瘤的诊断和治疗。本课题是在构建好癌症特异性抗原ccsp的单链抗体scFv-pET-11a表达载体的基础上,期望获得有检测活性的scFv重组抗体。首先,我们将scFv-pET-11a表达载体成功转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3),并利用IPTG诱导scFv在大肠杆菌中进行表达,通过SDS-PAGE凝胶电泳验证,显示重组抗体scFv主要以包涵体形式表达。在对IPTG的诱导时间进行优化之后,对获取的大量scFv包涵体进行复性,分别采用透析法、添加不同浓度复性促进剂法和高蛋白浓度不连续添加复性剂三种复性方法进行复性,高蛋白浓度不连续添加复性剂法获得的scFv通过对癌症特异性抗原ccsp利用Western blot进行检测,并用ECL和AP两种显色方法显色,显示其具有一定的检测活性和结合活性。此外,成功构建了分泌型表达载体scFv-pET-22b为下一步直接获得具有生物学活性的可溶性蛋白表达抗体奠定了基础。
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