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蛋白是由特定的基因编码而成的特定氨基酸序列，具有特定的构象和生化特性，体现在每一种蛋白具有特定的等电点(pI)和免疫交叉反应。然而，文献报道许多蛋白具有多个pI，不同蛋白之间也呈现出普遍的免疫交叉反应。 本实验室发现，一种富含苯丙氨酸的碱性短肽(BOP)能通过离子键和疏水作用与乙醇酸氧化酶(GO)等多种靶蛋白相结合，组成蛋白-BOP复合体，导致同一靶蛋白呈现多个pI，不同靶蛋白之间呈现免疫交叉反应。 BOP大量且普遍存在于多种动物、植物和微生物体内，可能发挥着某些重要的生理功能，这正是本文的研究目的。BOP在SDS电泳中向负极泳动，还能通过非共价键自身聚合形成近30种多聚体，表明其“粘性”极强。这种特性一方面解释了BOP尽管大量且普遍存在，却难于被发现;一方面也为研究其生理功能提供了思路，即BOP可能通过形成强的非共价键而发挥其“粘连”作用。 非共价键在蛋白的结构与功能上扮演主要角色:如蛋白多肽链折叠为稳定的高级结构、蛋白酶与辅酶的结合，以及蛋白互作等。 牛血清白蛋白(BSA)是牛血清中的一种球蛋白，包含66.446 kDa单体，能通过非共价键聚合形成二聚体和多种多聚体。本文以BSA为研究材料，采用等电聚焦电泳(IEF)、醋酸纤维素薄膜电泳(CAME)、点杂交(Dot blot)、Native-PAGE、SDS-PAGE、Western blot、电洗脱和氨基酸组成测定分析等方法，旨在探索BSA中是否含有BOP，以及BOP在BSA多聚体的形成过程中所发挥的重要作用。所得结果如下: 1) BSA在IEF中呈现多个pI，在SDS-CAME和SDS-PAGE中出现往负极泳动，再从负极回到正极的特殊电泳行为，以及在氨基酸组成测定分析中，BSA的苯丙氨酸含量要高于经cDNA推导出的苯丙氨酸的含量。表明BSA中可能含有BOP，组成BSA-BOP复合体，从而改变了BSA自身的特性。 2)梯度Native-PAGE显示，BSA呈现68 kDa大小的分子量，高于此前报道的66.446 kDa; CAME也显示，只有经SDS变性处理的BSA才出现往负极泳动的蛋白。制备识别BOP的GC抗体，分别对SDS变性处理前后的BSA和IgG-Free BSA进行免疫印迹分析。Native-PAGE和Western blot显示，两种BSA均不与GC抗体产生免疫交叉。Dot blot显示，只有经SDS变性处理的两种BSA才与GC抗体产生免疫交叉。SDS-PAGE和Western blot显示，BSA有时不与GC抗体产生免疫交叉，有时免疫交叉出现在BSA的全部亚基上，有时则出现在亚基的上缘或下缘，甚至出现在整张NC膜上。以上结果表明，BSA中含有BOP，且BOP位于BSA的内部，经变性处理后暴露出来才与GC抗体产生免疫交叉反应。 3) Native-PAGE显示，BSA呈现出清晰的单体、二聚体和多种多聚体条带;SDS-PAGE却显示，BSA66.4 kDa主带下方还出现了许多散开的蛋白条带。电洗脱回收BSA68kDa单体和140 kDa二聚体，并分别对其进行Native-PAGE、SDS-PAGE和Western blot分析。Native-PAGE显示，BSA68 kDa单体有时能聚合形成140 kDa二聚体，140 kDa二聚体又能解离成单体。SDS-PAGE显示，BSA68 kDa单体不再聚合形成140 kDa二聚体，140 kDa二聚体则被解离成单体。Native-PAGE和Western blot显示，BSA68 kDa单体和140kDa二聚体均不能与GC抗体产生免疫交叉。SDS-PAGE和Western blot显示，BSA68 kDa单体有时能与GC抗体产生免疫交叉。以上结果表明，BOP可能存在于BSA的内部，并充当了“粘连肽”的作用，介导BSA多聚体的形成。