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嗜肺军团菌(Legionellapneumophila)是一种在水环境中普遍存在的革兰氏阴性细菌,能够在水中长期存活。在适当的条件下可以进入宿主细胞内进行胞内增殖,对人体肺部的侵染能够导致一种名为“军团病”的非典型肺炎。在液体培养时,嗜肺军团菌进入指数后期后会表现出对紫外线、热激、渗透压和饥饿等胁迫的抵抗性。Dps(DNA binding protein from starved cells)是一个在稳定期大量表达的蛋白,能够非特异性的与DNA结合,保护DNA免受氧化胁迫和紫外线等外界因子的伤害。
本论文采用GFP表达的绿色荧光作为表型,通过转座子插入突变筛选dps的上游调控因子,一共获得7个候选突变株。通过测序确定转座子的插入位点,选定其中的’vacB进行深入研究。
通过非极性缺失技术将野生型菌株LpO2的vacB基因敲除,构建vacB功能缺失的突变株MGO2,研究野生菌株和vacB突变株的生理生化特征。结果表明vacB缺失并不影响菌株的生长,突变株对盐的敏感性、抗冷、抗酸和抗渗透压能力与野生型没有区别,但突变株对57℃热处理要比野生型菌株敏感。将GFP表达受dps启动子调控的质粒pBGO2分别转入野生菌株和突变菌株,通过荧光强度分析发现野生型菌株的绿色荧光值比要突变株高44倍,说明将vacB功能缺失后dps启动子的活性也大幅降低,进一步的证明了vacB基因确实是dps的调控基因。