生物相容性磁性纳米晶体的制备及其在生物分析与肿瘤早期诊断中的应用

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本论文的研究内容包括:(1)生物相容性Fe3O4纳米颗粒在分析检测中的应用;(2)磁性/上转换荧光NaGdF4∶Yb,Er纳米晶体的可控制备,活体肿瘤检测应用及体内药代动力学行为研究。   首先,构建了磁性纳米粒子聚集体作为抗体标记物的免疫层析体系,用于农药残留物的灵敏检测中。以“一锅法”制备的表面为羧基聚乙二醇(PEG)修饰的Fe3O4纳米颗粒为原料,通过EDC介导的酰胺化反应,利用多聚赖氨酸(PLL)使磁性纳米颗粒进行可控聚集。随后将制备的纳米颗粒聚集体与多克隆抗体进行耦联,并用作免疫层析中的显色标记物。研究发现单纯的Fe3O4纳米粒子作为标记物,免疫层析检测甲基对氧磷的灵敏度在1000 ng/mL以上。而利用聚集的磁性纳米粒子作为标记物,视觉检测灵敏度能达到150 ng/mL。借助光密度分析进行定量处理,利用聚集的磁性纳米粒子作为标记物的检出限可低至1.7 ng/mL,与单独的纳米颗粒作为标记物的检测灵敏度相比,提高了近40倍。这种利用粒子聚集体作为显色标记物的方法由于操作简单、灵敏度高,为免疫层析试纸灵敏度的提高提供了新的思路。   其次,利用在油酸-十八烯二元体系中的高温复分解反应合成了磁性/上转换荧光NaGdF4∶Yb,Er纳米晶体。通过分别对NaOH或NH4F的调控可以实现纳米晶体尺寸、形貌以及荧光发射的调控。配体置换后得到的表面为马来酰亚胺PEG修饰的NaGdF4∶Yb,Er纳米颗粒具有极好的胶体稳定性及光学稳定性。体外细胞毒性实验表明,马来酰亚胺-PEG修饰的NaGdF4∶Yb,Er纳米颗粒具有良好的生物相容性。   在上述工作的基础上通过“Click”反应,将NaGdF4∶Yb,Er纳米颗粒与特异性识别肿瘤细胞表皮生长因子受体的单克隆抗体(anti-EGFR抗体)进行耦联,成功构建了磁性/上转换荧光双模态分子影像探针,并在BALB/c裸鼠腹腔肿瘤转移模型和皮下肿瘤转移模型中,实现了小尺寸肿瘤(直径小于2mm)的靶向磁共振成像和上转换荧光成像。   最后,对纳米颗粒的药代动力学行为进行了研究。结果显示小尺寸(5.1 nm)的纳米颗粒具有较长的血液半衰期,尾静脉注射体内后的大部分纳米颗粒首先在肝和脾中富集,一天时达到峰值,而后随着时间的推移,肝脏中的Gd的%ID/g逐渐下降。代谢物中Gd含量分析表明,小尺寸的纳米颗粒通过尿液和粪便清除方式排出体外,而大尺寸的纳米颗粒的清除方式为粪便清除。对粪便分离物的TEM表征中观察到的纳米颗粒的尺寸与注射之前没有变化,进一步的溶解性分析表明NaGdF4在体内血液环境中解离的自由Gd3+量为126 fmol。优异的肿瘤靶向成像效果、高的生物相容性以及适宜的体内代谢周期,为NaGdF4∶Yb,Er纳米颗粒体内的安全应用奠定了实验基础。
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