【摘 要】
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为了建立快速检测血清中IgG含量的金标SPA法,本论文通过金标SPA的制备、金标SPA法的条件优化、评价和应用试验,初步建立了一个快速检测猪血清IgG含量的方法。金标SPA的制备。
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为了建立快速检测血清中IgG含量的金标SPA法,本论文通过金标SPA的制备、金标SPA法的条件优化、评价和应用试验,初步建立了一个快速检测猪血清IgG含量的方法。金标SPA的制备。本试验用直径为10nm的胶体金对SPA(金黄色葡萄球菌A蛋白)进行标记和超速离心纯化,制得金标SPA即金探针,用两点法检测金标SPA的生物活性和稳定性,结果发现:金标SPA的活性较好,能稳定地保存三个月左右。金标SPA法的条件优化。本试验分别从金探针的浓度、溶液pH值、温度和作用时间四个因素进行探讨,结果发现在常温(15—20℃)且温度变化不大(±1℃)、pH7.4、金标SPA最佳稀释比为1∶4的条件下作用40min左右为金标SPA法的最佳作用条件;测定猪血清中IgG含量时,血清最佳稀释倍数为1∶1000。方法的评价和应用。本试验以检测猪血清中IgG为例,通过线性范围试验、批内和批间重复性试验、回收试验、方法对比试验对金标SPA法进行评价,并在成年猪、不同日龄仔猪的血清IgG检测方面进行应用,进一步验证了该法的可行性和实用性。结果表明:该方法灵敏度高,检测范围2.16～116.67μg/mL;回收率为98.18%;批内和批间变异系数分别为4.54%,5.88%;通过与夹心ELASA方法进行对比,发现两种方法的测定值高度相关(r=0.9945),但金标SPA法操作简便、快速、一步完成、不需多次洗涤、易于自动化操作。因此,具有很高临床应用价值。
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