【摘 要】
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目的:5-羟色胺1A受体（5-HT1AR）与食欲素1型受体（OX1R）与抑郁障碍的发生密切相关,且两者都属于G蛋白偶联受体。上述两种受体可以发生二聚化,从而形成二聚体,此二聚体的形成为理解神经传递机制开辟了新的途径,也为理解抑郁障碍的发病机制及新的药物开发开辟了一个新的角度。本次实验利用双免疫荧光实验验证5-HT1AR与OX1R在前额叶皮质细胞膜上的共定位,这是两受体能够在前额叶皮层发生二聚化的前
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目的:5-羟色胺1A受体（5-HT1AR）与食欲素1型受体（OX1R）与抑郁障碍的发生密切相关,且两者都属于G蛋白偶联受体。上述两种受体可以发生二聚化,从而形成二聚体,此二聚体的形成为理解神经传递机制开辟了新的途径,也为理解抑郁障碍的发病机制及新的药物开发开辟了一个新的角度。本次实验利用双免疫荧光实验验证5-HT1AR与OX1R在前额叶皮质细胞膜上的共定位,这是两受体能够在前额叶皮层发生二聚化的前提。之后向大鼠侧脑室注射能阻止此二聚体形成的干扰肽,比较干扰肽组与模型组之间抑郁行为学指标、前额叶皮层中的脑神经营养因子（BDNF）、p-CREB、海马突触后致密度蛋白（PSD-95）表达量,进一步揭示5-HT1AR-OX1R异源二聚体及干扰肽在抑郁障碍中的作用机制。其显示的独特药理学和功能特性,可能成为治疗抑郁障碍的新突破点。方法:采用孤养加慢性不可预知性温和刺激（CUMS）方法连续刺激大鼠28天,以建造抑郁症模型,通过比较各组大鼠的体重、糖水偏好率及强迫游泳静止不动时间3项行为学指标来判定建模的成功。建模成功后将大鼠分为正常对照组、抑郁模型组、5-HT1AR-TM4组、5-HT1AR-TM5组、OX1R-TM5组。连续向后3组大鼠侧脑室分别注射干扰肽5-HT1AR-TM4、5-HT1AR-TM5和OX1R-TM5,来抑制5-HT1AR/OX1R二聚体的合成。注射6天后对大鼠进行行为学检测。利用双免疫荧光技术来验证5-HT1AR与OX1R在前额叶细胞膜上的共定位。利用蛋白免疫印迹（Western blotting,WB）技术检测大鼠前额叶皮层的抑郁障碍的重要指标BDNF、p-CREB及海马体PSD-95蛋白表达量。结果:（1）利用CUMS方法建造SD大鼠抑郁症模型,行为学结果显示与正常对照组相比,模型组和干扰肽组大鼠体重明显下降、糖水偏好率明显下降,强迫游泳静止不动时间明显上升。说明建模成功,可以进行后续实验。（2）注射干扰肽6天后统计分析各组大鼠的行为学结果显示,与对照组相比,模型组抑郁行为没有改善。与模型组相比,干扰肽组抑郁行为均有了显著缓解。（3）通过免疫荧光方法检测到大鼠前额叶皮层在同一个细胞膜上存在5-HT1AR与OX1R的共表达。（4）通过Western blot方法检测各组大鼠脑内BDNF、p-CREB、PSD-95的蛋白表达量,结果显示,与对照组相比,模型组中大鼠前额叶皮质的BDNF、p-CREB和海马体的PSD-95的蛋白表达量明显降低。与模型组相比,干扰肽组大鼠前额叶皮层的BDNF、p-CREB及海马体PSD-95的蛋白表达量明显升高,具有显著性差异。结论:本课题实验结果表明5-HT1AR与OX1R能共同定位于大鼠前额叶皮质细胞膜上。通过对注射干扰肽后的抑郁大鼠行为学及脑组织内BDNF、p-CREB、PSD-95蛋白表达量的分析比较,表明5-HT1AR-TM4、5-HT1AR-TM5和OX1R-TM5干扰5-HT1AR/OX1R异源二聚体形成后,可缓解抑郁状态,从而为抑郁障碍的治疗提供新思路。
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