论文部分内容阅读
目的：探讨柴胡皂苷A、黄芩素及其配伍对肝癌细胞抗增殖、促凋亡的作用机制。方法：本实验主要通过体外细胞培养，将柴胡皂苷A、黄芩素及其配伍分别作用于人肝癌HepG2和SMMC-7721细胞，采用MTT法测定柴胡皂苷A、黄芩素及其配伍对HepG2细胞和SMMC-7721细胞增殖的影响；选用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标法检测给药后HepG2和SMMC-7721细胞凋亡率；并选用流式细胞仪Propidium Iodide(PI)单标法检测对HepG2和SMMC-7721细胞周期过程的影响；采用免疫组化法检测HepG2和SMMC-7721细胞凋亡的相关基因caspase-3和cox-2蛋白表达水平。结果：体外细胞毒实验（MTT）中发现柴胡皂苷A、黄芩素及其配伍对HepG2和SMMC-7721细胞的增殖具有明显的抑制作用，同时发现配伍后抑制作用明显强于两药单独使用；流式细胞仪的测定结果显示给药培养48h后，与阴性对照组比较，柴胡皂苷A、黄芩素及其配伍对HepG2和SMMC-7721细胞凋亡率明显增高，配伍组与柴胡皂苷A组、黄芩素组相比，细胞的凋亡率显著增大；流式细胞仪检测显示,与阴性对照组比较，柴胡皂苷A、黄芩素作用于HepG2和SMMC-7721细胞48h后均能使G0/G1期细胞数量显著增加， S期和G2/M期细胞减少；配伍组给药培养48h后，HepG2和SMMC-7721细胞的G0/G1期细胞数量均增加， S期和G2/M期细胞减少，与柴胡皂苷A、黄芩素单用组比较均有显著性差异，说明两药配伍有协同抑制作用；免疫细胞化学染色发现柴胡皂苷A、黄芩素及其配伍作用48h后，与凋亡相关基因COX-2表达下调和Caspase-3表达升高，且配伍组作用明显强于柴胡皂苷A组和黄芩素组。结论：柴胡皂苷A与黄芩素对肝癌HepG2和SMMC-7721细胞具有抑增殖、促凋亡的作用，并且两者配伍后对HepG2和SMMC-7721细胞抑增殖、促凋亡的作用具有明显的协同作用；柴胡皂苷A、黄芩素及其配伍对HepG2和SMMC-7721细胞抗增殖、促凋亡的协同作用机制可能是通过调节抑凋亡基因、促凋亡基因的表达和调节细胞周期变化等途径来实现的。